71092
PopCulture® Reagenz
Synonym(e):
E. coli culture medium protein extraction reagent
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Über diesen Artikel
NACRES:
NA.77
UNSPSC Code:
41106511
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Das PopCulture Reagenz* ist eine gepufferte Mischung konzentrierter Detergenzien, die zur Extraktion von Proteinen aus E.-coli-Zellen direkt in deren Kulturmedium entwickelt wurde. Bei dieser Methode werden Zellkultur, Proteinextraktion und -aufreinigung im ursprünglichen Kulturröhrchen oder in der Multiwell-Platte durchgeführt. PopCulture perforiert die E.-coli-Zellwand, ohne lösliche Proteine zu denaturieren, und schützt Proteine vor den pH-Extremen, die in Kulturmedien mit hoher Dichte auftreten. Rekombinante Proteine können direkt getestet oder durch Zugabe einer Affinitätsmatrix aufgereinigt werden. Anschließend wird der Komplex aus Matrix und Zielprotein gewaschen, um Kulturmedium und zelluläre Verunreinigungen zu entfernen, und das aufgereinigte Protein wird von der Matrix eluiert. Die Aufreinigung von Fusionsproteinen aus gesamten Kulturextrakten wurde sowohl mit IMAC- als auch mit GST-Affinitätschromatographie-Verfahren nachgewiesen (1).
Um das PopCulture Aufreinigungsverfahren weiter zu verbessern, können Lysozym und/oder Benzonase® Nuklease hinzugefügt werden. Lysozym spaltet eine Peptidoglykanbindung in der Zellwand von E. coli, wodurch die Zelllyse verstärkt und die Proteinausbeute erhöht wird (1, 2). Die Proteine können in einem Wirt exprimiert werden, der für T7-Lysozym kodiert (pLysS-Wirt), oder es kann nach dem PopCulture Reagenz exogenes Lysozym zugegeben werden. Zudem kann Benzonase Nuklease hinzugefügt werden, um endogene Nukleinsäuren abzubauen, die die Aufreinigung aufgrund ihrer hohen Viskosität beeinträchtigen könnten.
Das PopCulture Proteinaufreinigungsverfahren eignet sich ideal für die robotergestützte Probenverarbeitung mit hohem Durchsatz (HT) für die Proteomforschung oder für jede andere Anwendung, die von der erhöhten Geschwindigkeit und dem Komfort profitieren würde. Die magnetischen Agarose-Capture-Harze (z. B. GST•Bind<TMSYMBOL></TMSYMBOL> Magnetische Agarose-Perlen, His•Bind<TMSYMBOL></TMSYMBOL> Magnetische Agarose-Perlen) sind optimal für HT-Anwendungen, da das gesamte Verfahren in einem einzigen Röhrchen durchgeführt werden kann, ohne dass Säulen oder Zentrifugation erforderlich sind.
* Zum Patent angemeldet.
Um das PopCulture Aufreinigungsverfahren weiter zu verbessern, können Lysozym und/oder Benzonase® Nuklease hinzugefügt werden. Lysozym spaltet eine Peptidoglykanbindung in der Zellwand von E. coli, wodurch die Zelllyse verstärkt und die Proteinausbeute erhöht wird (1, 2). Die Proteine können in einem Wirt exprimiert werden, der für T7-Lysozym kodiert (pLysS-Wirt), oder es kann nach dem PopCulture Reagenz exogenes Lysozym zugegeben werden. Zudem kann Benzonase Nuklease hinzugefügt werden, um endogene Nukleinsäuren abzubauen, die die Aufreinigung aufgrund ihrer hohen Viskosität beeinträchtigen könnten.
Das PopCulture Proteinaufreinigungsverfahren eignet sich ideal für die robotergestützte Probenverarbeitung mit hohem Durchsatz (HT) für die Proteomforschung oder für jede andere Anwendung, die von der erhöhten Geschwindigkeit und dem Komfort profitieren würde. Die magnetischen Agarose-Capture-Harze (z. B. GST•Bind<TMSYMBOL></TMSYMBOL> Magnetische Agarose-Perlen, His•Bind<TMSYMBOL></TMSYMBOL> Magnetische Agarose-Perlen) sind optimal für HT-Anwendungen, da das gesamte Verfahren in einem einzigen Röhrchen durchgeführt werden kann, ohne dass Säulen oder Zentrifugation erforderlich sind.
* Zum Patent angemeldet.
Other Notes
1. Grabski, A., Drott, D., Handley, M., Mehler, M. and Novy, R. (2001). inNovations13, 1–4.
2. Inouye, M., Arnheim, N. and Sternglanz, T. (1973). J. Biol. Chem.248, 7247.
2. Inouye, M., Arnheim, N. and Sternglanz, T. (1973). J. Biol. Chem.248, 7247.
Legal Information
Dieses Produkt ist durch das EP-Patent 1,432,822 geschützt, das der EMD Chemicals Inc. bzw. ihren verbundenen Unternehmen gehört.
Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
POPCULTURE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
Toxizität: Reizstoff (B)
Lagerklasse
10 - Combustible liquids
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