APT423

CaspaTag Caspase-3,7-In-Situ-Assaykit, Fluorescein

The CaspaTag Caspase-3/7 In Situ Assay Kit, Fluorescein for Flow Cytometry is a fluorescent-based assay for detection of active caspase-3 or caspase-7 in cells undergoing apoptosis.

• UNSPSC Code: 12161503
• NACRES: NA.54
• eCl@ss: 32161000

Eigenschaften

• Quality Segment: 100
• species reactivity (predicted by homology): mammals
• manufacturer/tradename: CaspaTag, Chemicon^®
• technique(s): activity assay: suitable, flow cytometry: suitable
• NCBI accession no.: NM_004346.3, NM_032991.2
• UniProt accession no.: P42574, Q14790
• detection method: fluorometric
• shipped in: wet ice
• Gene Information: human ... CASP3(836)

Beschreibung

General description

Die Apoptose ist eine evolutionär erhaltene Form des Zelltods, der im Anschluss an einem speziellen zellulären Prozess erfolgt. Zentralen Bestandteil dieses Prozesses bildet eine Kaskade aus proteolytischen Enzymen, sogenannten Caspasen. Diese Enzyme sind an einer Reihe von Reaktionen beteiligt, die in Reaktion auf pro-apoptotische Signale ausgelöst werden und zur Spaltung von Proteinsubstraten und zum anschließenden Zerfall der Zelle führen.1

Caspasen wurden in vielen unterschiedlichen Organismen – von C. elegans bis hin zum Menschen – identifiziert. Säugetier-Caspasen spielen unterschiedliche Rollen bei der Apoptose und bei Entzündungen. Bei der Apoptose sind Caspasen für die proteolytische Spaltung zuständig, die zum Zerfall der Zelle führt (Effektor-Caspasen) und an vorgeschalteten regulatorischen Ereignissen beteiligt (Initiator-Caspasen). Aktive Caspasen bestehen aus zwei großen und zwei kleinen Untereinheiten, die zwei Heterodimere bilden, die sich zu einem Tetramer verbinden.2–4 Wie auch andere Proteasen werden Caspasen entweder autokatalytisch oder in einer Kaskade von Enzymen mit ähnlicher Spezifität als Vorläufer synthetisiert, die eine proteolytische Reifung durchlaufen.5

Caspase-Enzyme können am Zielsubstrat vorhandene Sequenzen mit 4 oder 5 Aminosäuren, die einen Asparaginsäurerest enthalten müssen, spezifisch erkennen. Dieser Rest ist das Ziel der Spaltung, die am Carbonyl-Ende des Asparaginsäurerests erfolgt.6 Caspasen können mittels Immunpräzipitation, Immunblotting-Verfahren unter Verwendung von Caspase-spezifischen Antikörpern oder durch den Einsatz von Fluorochrom-Substraten, die bei Spaltung der Caspase fluoreszieren, nachgewiesen werden.

Application

Das CHEMICON^® CaspaTag Caspase-3/7-In-Situ-Assaykit, Fluorescein, ist ein Fluoreszenz-basierter Assay zum Nachweis von aktiver Caspase-3 oder Caspase-7 in Zellen, in denen die Apoptose ausgelöst wurde. Dieses Kit ist nur für Forschungszwecke vorgesehen. Nicht zur Verwendung in diagnostischen oder therapeutischen Verfahren vorgesehen.

Testprinzip

CHEMICON′s CaspaTag In-Situ-Caspase-Detektionskits nutzen einen neuen Ansatz zum Nachweis von aktiven Caspasen. Die Methodik basiert auf den Fluorchrom-Inhibitoren von Caspasen (FLICA). Die Inhibitoren sind zellpermeabel und nicht zytotoxisch. Sobald sich der Inhibitor in der Zelle befindet, bindet er kovalent an die aktive Caspase7. Bei diesem Kit wird ein mit Carboxyfluorescein-markierter Fluormethyl-Keton-Peptidinhibitor von Caspase-3 (FAM-DEVD-FMK) eingesetzt, der eine grüne Fluoreszenz erzeugt. Bei Zugabe in eine Zellpopulatin dringt die FAM-DEVD-FMK-Sonde in jede Zelle ein und bindet kovalent an einen reaktiven Cysteinrest, der sich an der großen Untereinheit des aktiven Caspase-Heterodimers befindet, wodurch eine weitere enzymatische Aktivität gehemmt wird. Das gebundene markierte Reagens bleibt in der Zelle und jegliches ungebundene Reagens diffundiert aus der Zelle und wird weggewaschen. Anhand des grünen Fluoreszenzsignals kann die bei Zugabe des Reagens in der Zelle vorhandene Menge an aktiver Caspase-3 oder Caspase-7 direkt gemessen werden. Zellen, die das gebundene markierte Reagens enthalten, können mittels 96-Well-Platten-basierter Fluorometrie, Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie analysiert werden.

Das CaspaTag Caspase-3/7-In-Situ-Assaykit, Fluorescein, für die Durchflusszytometrie ist ein Fluoreszenz-basierter Assay zum Nachweis von aktiver Caspase-3 oder Caspase-7 in Zellen, in denen die Apoptose ausgelöst wurde.

Forschungsunterkategorie
Apoptose und Krebs

Preparation Note

· Ungeöffnete Kitmaterialien bis zum Verfallsdatum bei 2–8 °C aufbewahren.

· Das rekonstituierte FLICA-Reagens (150X) kann bis zu 6 Monate bei -20 °C eingefroren und in diesem Zeitraum zweimal aufgetaut werden. Bei Bedarf in Einzelröhrchen aus Braunglas aliquotieren. Stets vor Licht schützen.

· Der verdünnte (1X) Waschpuffer ist bei -20 °C bis zu 2 Wochen haltbar.

Other Notes

FLICA-Reagens (FAM-DEVD-FMK): Ein lyophilisiertes Fläschchen

10X Waschpuffer: 15 ml

Fixiermittel: 6 ml

Propidiumiodid: 1 ml bei 250 μg/ml, gebrauchsfertig

Hoechst Farbstoff 1 ml bei 200 μg/ml, gebrauchsfertig

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS06,GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H302 + H312,H315,H317,H319,H331,H335,H341,H350,H371
• pcodes: P280 - P301 + P312 - P302 + P352 + P312 - P304 + P340 + P311 - P305 + P351 + P338 - P308 + P311
• Hazard Classifications: Acute Tox. 3 Inhalation - Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Oral - Carc. 1B - Eye Irrit. 2 - Muta. 2 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 2 - STOT SE 3
• target_organs: Eyes,Central nervous system, Respiratory system
• Lagerklasse: 6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects