COLLD-RO

Collagenase D

from Clostridium histolyticum

• UNSPSC Code: 12352204
• EG-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Biological source: Clostridium histolyticum
• Concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)

Eigenschaften

• biological source: Clostridium histolyticum
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• collagenase activity: >0.15 U/mg lyophilizate
• packaging: pkg of 100 mg (11088858001), pkg of 2.5 g (11088882001), pkg of 500 mg (11088866001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)
• technique(s): tissue processing: suitable
• color: light brown
• optimum pH: 6.0-8.0
• solubility: water: soluble
• NCBI accession no.: WP_171012037
• application(s): cell analysis
• foreign activity: Clostripain 0.060 U/mg, Proteases 8 U/mg ( Azocoll), Trypsin <0.2 U/mg (with BAEE)
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Collagenase D wird aus Clostridium histolyticum-Kulturen durch Filtration, Ammoniumsulfat-Fällung, Dialyse und Lyophilisierung hergestellt.

Application

Kollagenase aus C. histolyticum findet breite Anwendung für die Zerlegung vieler Gewebetypen (z.B. Lunge, Herz, Muskel, Knochen, Fettgewebe, Leber, Niere, Knorpel, Brustdrüse, Plazenta, Blutgefäße, Gehirn, Tumoren) und für die Herstellung von Einzelzellsuspensionen zur Etablierung von primären Zellkultursystemen. Kollagenase D wird für Anwendungen empfohlen, bei denen die Funktionsfähigkeit und Integrität von Proteinen auf der Zelloberfläche wichtig ist.
Clostridium-Kollagenase von Roche wird zur Präparation von Zellen aus vielen Gewebetypen verwendet, darunter Leberzellen, Fettzellen, Langerhans-Inseln, Epithelzellen, Muskelzellen, Endothelzellen, usw.[1][2][3][4] Es sollte jedoch bei jeder Enzymcharge empirisch ermittelt werden, ob sie für die Zerlegung eines bestimmten Gewebes geeignet ist.

Biochem/physiol Actions

Collagenase baut natives Kollagen ab. Clostripain, trypsinähnliche Enzyme und neutrale Proteasen bauen ebenfalls andere Proteine ab.

Features and Benefits

Inhalt
Lyophilisat, nicht steril

Physical form

Lyophilisat, nicht steril.

Preparation Note

Aktivator: Ca²⁺
Arbeitskonzentration: 0,5 - 2,5 mg/mL
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): -15 bis -25°C
Roche empfiehlt, nur die Menge an Lyophilisat zu rekonstituieren, die für die sofortige Anwendung benötigt wird. Die rekonstituierte Lösung kann bei -15 bis -25 °C bis zu einer Woche gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden, da die Aktivität nach der Rekonstitution abnimmt.

Inhibitoren:
Kollagenase-Hemmer: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-Mercaptoethanol
Kollagenase wird durch Serum nicht gehemmt.
Clostripain-Inhibitoren: TLCK
Trypsin-Inhibitoren: Aprotinin, Trypsin-Inhibitor (Eiweiß, Sojabohnen)

Enzymaktivität:
Kollagenaseaktivität: >0,15 U/mg (nach Wünsch) (+25°C, 4-Phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg als Substrat)
Kontaminierende Enzymaktivitäten: Trypsin, Clostripain und gesamtproteolytische Aktivität
Collagenase D hat eine normale bis hohe Collagenase-Aktivität und eine sehr geringe tryptische Aktivität (üblicherweise <0,2 Einheiten/mg, BAEE als Substrat).

Rekonstitution in jeder ausgeglichenen Salzlösung (z.B. HBSS)

Vor Licht schützen

Other Notes

Kollagenase von Roche wird in Wünsch-Einheiten (1 μmol Produkt wird pro Minute bei +25 °C mit Wünsch-Substrat gebildet) getestet.
Die Kollagenase-Aktivität wird häufig in Mandl-Einheiten angegeben (1 μmol Leucin wird in 5 Stunden bei +37 °C aus Kollagen freigesetzt).
Leider gibt es keinen einheitlichen Umrechnungsfaktor zwischen den beiden Aktivitätseinheiten, weil die Mandl-Einheit zum Teil von der nicht definierbaren Variablen der Konzentration kontaminierender Proteasen in der Kollagenasezubereitung abhängt. Eine reinere Kollagenasezubereitung ergäbe somit eine geringere spezifische Aktivität in Mandl-Einheiten als eine Rohzubereitung. Für Clostridium-Zubereitungen sind üblicherweise Umrechnungsfaktoren von ca. 1:1800 angegeben (eine bestimmte Charge Clostridium-Kollagenase enthielt z.B. ca. 0,15 Wünsch-U/mg und 250 Mandl-U/mg).

Nur für die Life Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H319,H334,H335