C9407

Collagenase aus Clostridium histolyticum

powder, Suitable for the digestion and isolation of physiologically active pancreatic islet cells, suitable for cell culture

• Synonym(e): Clostridiopeptidase A
• CAS-Nummer: 9001-12-1
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.75
• EC Number: 232-582-9
• MDL number: MFCD00130830
• EG-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥800 units/mg solid
• Biological source: Clostridium histolyticum

Eigenschaften

• biological source: Clostridium histolyticum
• Quality Segment: 200
• form: powder
• specific activity: ≥800 units/mg solid
• mol wt: 68-130 kDa
• packaging: pkg of 1 μmol
• technique(s): cell culture | mammalian: suitable
• pH: 7.4
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Kollagenase-Enzym aus Clostridium histolyticum hat Kollagenbindungsdomäne (CBD) und polyzystische nierenerkrankungsartige (PKD-artige) Domänen. Es hat außerdem Ca²⁺-Bindungsstellen zur Calciumbindung, was für die Funktionalität wichtig ist. Kollagenase wird bei der Behandlung von Bindegewebserkrankungen (Dupuytren-Kontraktur)′ eingesetzt.

Application

Dieses Produkt eignet sich für die Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem adultem und fötalem Hirngewebe, Lungenepithelgewebe und vielen anderen Epithelgeweben. Es ist ebenfalls bei Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau, bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Rattenleberzellen und der Hepatozytenpräparation wirksam. Kollagenase wird ebenfalls bei der Präparation von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glycosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Dieses Enzym wurde für die Freisetzung von Hepatozyten bei einer Konzentration von ca. 1 mg/mL getestet. Konzentrationen für den Verdau liegen zwischen 0,1 und 5 mg/mL.

Kollagenase von Clostridium histolyticum wird beim Verdau folgender Proben eingesetzt:

• Proben zur Isolierung von Langerhans-Inseln
• Pulmonalarterieproben zur Isolierung von pulmonalvaskulären glatten Muskelzellen (PVSMCs)
• Knorpelproben zur Isolierung von Chondrozyten

Biochem/physiol Actions

Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.

Das Kollagenase-Produkt ist ein Enzymgemisch, das von C. histolyticum sezerniert wird, wobei unterschiedliche Produkte durch die relativen Verhältnisse der 10-18 Komponenten in den sezernierten Enzymen differenziert werden. Die Hauptkomponenten sind zwei Kollagenasen: Clostripain und eine neutrale Protease. Die synergistische Aktion dieser Enzyme baut Kollagen und andere intrazelluläre Komponenten ab. Die Aktion von Kollagenase-Enzymen sowie der neutralen Protease ist für eine effektive Freisetzung von Zellen aus Gewebe erforderlich. Verschiedene Typen von Kollagen sind die natürlichen Substrate für Kollagenase.

Preparation Note

Dieses Produkt wird aus Kollagenase Typ XI (C7657) von Clostridium histolyticum hergestellt. Es enthält außerdem Clostripain, unspezifische neutrale Protease und tryptische Aktivitäten. Lösungen werden üblicherweise mit 1-2 mg/ml in TESCA-Puffer hergestellt (enthält 50 mM TES, 0,36 mM Calciumchlorid, pH-Wert 7,4 bei 37 °C).

Other Notes

Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.

Disclaimer

Bei Lieferung ist dieses Produkt für die Dauer von einem Jahr bei -20 °C haltbar. Es kommt innerhalb von 30 Tagen bei 37 °C, 50 °C und -20 °C zu keinem Verlust bei der FALGPA- oder Proteaseaktivität. Lösungen von RohKollagenase sind stabil, wenn sie schnell in Aliquoten (10 mg/ml) eingefroren und bei -20 °C tiefgekühlt gelagert werden. Weitere Gefrier-/Auftauzyklen schädigen die Lösung. Bei Lagerung auf Eis behält das Produkt seine gesamte Aktivität über 7 Stunden.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS07
• Signalwort: Danger
• Gefahrencodes: H315,H319,H334,H335
• Sicherheitshinweise: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• Was ist los?: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• PSA (Persönliche Schutzausrüstung): dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves