Preparation of the stock solution in Tris-Nacl buffer at pH 7.5 has not been tested and requires validation through literature review. The amount of thrombin required for protein cleavage depends on the specific protein and expression system and should be optimized accordingly. As a starting point, use 1 to 10 units of thrombin per milligram of recombinant protein.
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T7326
Thrombin aus Rinderplasma
≥60 NIH units/mg protein (biuret)
Synonym(e):
Faktor IIa
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Über diesen Artikel
CAS-Nummer:
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.54
EG-Nummer:
MDL number:
Specific activity:
≥60 NIH units/mg protein (biuret)
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lyophilized powder
Quality Segment
specific activity
≥60 NIH units/mg protein (biuret)
composition
Protein, ≥50%
storage temp.
−20°C
General description
Thrombin ist die finale Koagulationsprotease bei der Hämostase mit koagulationsfördernder und koagulationshemmender Wirkung. Thrombin umfasst eine A-Kette und eine B-Kette mit der katalytischen Tasche. Die C-terminale Region weist eine Fibrinogenerkennungsstelle (FRS) und eine Heparinbindungsstelle (HBS) auf. Die Hauptfunktion von Thrombin besteht in der Spaltung von Fibrinogen zu Fibrin. Es koordiniert die Gerinnungskaskade und koordiniert mit proteaseaktivierten Rezeptoren (PAR), um physiologische Funktionen zu regulieren. Ein hoher Thrombinspiegel löst eine neurotoxische Wirkung in dopaminergen Neuronen aus und trägt zur Progression von Parkinson bei. Eine Veränderung des Thrombinspiegels führt bei Multipler Sklerose zu einer entsprechenden Anpassung des Koagulationswegs. Patienten mit koronarer Herzkrankheit (KHK) weisen einen erhöhten Thrombinspiegel auf.
Application
Thrombin wird für die stellenspezifische Spaltung von rekombinanten Fusionsproteinen mit einer zugänglichen Thrombin-Erkennungsstelle zum Entfernen von Affinitäts-Tags verwendet. Thrombin wurde in einer Studie zur Untersuchung von Gerinnungsabnormalitäten bei akuter Leberinsuffizienz eingesetzt.
Thrombin aus Rinderplasma kann wie folgt verwendet werden:
als Revitalisierungsmodell zur Nachahmung der Bluterzeugung im Wurzelkanal
- bei der Erzeugung von Fibrin aus in Mikrobläschen eingebettetem Fibrinogen
- für die Spaltung von Hydrogenase-Reifungsprotein (HypF-N) aus dem Nickelharz
als Revitalisierungsmodell zur Nachahmung der Bluterzeugung im Wurzelkanal
Biochem/physiol Actions
Serinprotease, die selektiv Arg-Gly-Bindungen in Fibrinogen spaltet, um Fibrin und Fibrinopeptide A und B zu bilden.
Physical form
Lyophilisiertes Pulver mit Natriumchlorid und Tris-HCl, pH-Wert 7,0
Preparation Note
Traditionelle Thrombin-Produkte werden mit Thromboplastin aus dem Rinderhirn aktiviert, wogegen T7326 mit Thromboplastin aus der Rinderlunge aktiviert wird. In der Aufbereitung sind keine Rinderhirnprodukte enthalten.
Analysis Note
Beim NIH-Assay werden 0,2 ml verdünntes Plasma (1:1 mit Kochsalzlösung) als Substrat und 0,1 ml der Thrombinprobe (stabilisiert in einer 1%igen gepufferten Albuminlösung) auf Basis einer modifizierten Biggs-Methode analysiert. Zur Bestimmung der Thrombinkonzentrationen werden nur Gerinnungszeiten im Bereich von 15 bis 25 Sekunden verwendet.
Die Aktivität wird in NIH-Einheiten ausgedrückt, die aus einem direkten Vergleich mit einem NIH-Thrombin-Referenzstandard (Charge K) gewonnen werden
Other Notes
Die Aktivität wird in NIH-Einheiten ausgedrückt, die sich aus einem direkten Vergleich mit einem NIH-Thrombin-Referenzstandard ergeben.
Für weitere Informationen siehe thrombin at www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.
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|---|---|---|---|
| description ≥60 NIH units/mg protein (biuret) | description Suitable for manufacturing of diagnostic kits and reagents | description lyophilized powder, 600-2,000 NIH units/mg protein (biuret) | description lyophilized powder, 40-500 NIH units/mg protein (biuret) |
| specific activity ≥60 NIH units/mg protein (biuret) | specific activity 80-500 NIH units/mg protein | specific activity 600-2,000 NIH units/mg protein (biuret) | specific activity 40-500 NIH units/mg protein (biuret) |
| form lyophilized powder | form powder | form lyophilized powder | form lyophilized powder |
| storage temp. −20°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C |
| Quality Level 200 | Quality Level 400 | Quality Level 300 | Quality Level 300 |
| composition Protein, ≥50% | composition - | composition - | composition Protein, 40-60% |
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Lagerklasse
11 - Combustible Solids
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PSA (Persönliche Schutzausrüstung)
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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Can the stock be prepared in Tris-Nacl buffer of pH 7.5? And in what ratio of protein should cleavage and thrombin be used, and what is the ideal condition for cleavage?
1 answer-
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Dear team I would like to ask about this product T7326 (Thrombin from bovine plasma ) ,1000U. What is the best way of preparation? If I would like to prepare 2.5U/L How should I do that? Regards
1 answer-
Stock solutions can be prepared at a concentration of 100 units/mL in a 0.1% (w/v) BSA solution. Further dilutions can be prepared fresh to the final desired working concentration.
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