Risoluzione dei problemi della coltura cellulare

Mal identificazione delle linee cellulari

Studi recenti stimano che l'errata identificazione possa riguardare fino a un terzo di tutte le linee cellulari in uso. Queste scoperte possono mettere in discussione i risultati pubblicati sui sistemi biologici basati su modelli di linee cellulari. I fattori che portano all'errata identificazione/contaminazione delle linee cellulari includono:

• Contaminazione con linee cellulari aggressive: L'analisi isoenzimatica ha dimostrato che molte linee cellulari condividono una rara isoforma enzimatica con le cellule HeLa. È stato poi dimostrato che HeLa è la linea cellulare invasiva più comune negli stock di coltura.
• Pratiche di documentazione ed etichettatura: Le fiasche di coltura cellulare, le piastre, le crioviali e i contenitori del congelatore devono essere chiaramente etichettati e le mappe di conservazione dell'azoto liquido devono essere rigorosamente mantenute per riflettere l'aggiunta, il prelievo e la ricollocazione delle scorte cellulari.
• Prestito di linee cellulari: La condivisione di cellule tra laboratori vicini è una pratica comune che porta a errori nell'identità delle linee cellulari. Le linee cellulari dovrebbero essere ottenute solo da depositi di cellule affidabili come ECACC, la Collezione Europea di Colture Cellulari Autenticate presso Public Health England.

Essere informati sulle cause comuni di contaminazione incrociata delle linee cellulari e su come proteggere il proprio lavoro dalle sue conseguenze.

Contaminazione microbica delle colture cellulari

I terreni di coltura e le condizioni di incubazione forniscono l'ambiente ideale per le cellule e per i contaminanti batterici, fungini e virali. Per aumentare la diligente aderenza alla tecnica di coltura asettica, le colture devono essere regolarmente esaminate al microscopio per verificare la presenza di intrusi batterici e fungini. Alcuni contaminanti microbici ubiquitari sfuggono alla rilevazione visiva: si stima che fino al 30% di tutte le colture sia contaminato da micoplasma. I reagenti e i kit progettati per la rilevazione di micoplasmi invisibili sono spesso basati sull'amplificazione PCR, che può essere utilizzata anche per rilevare contaminanti virali.

Impara come mantenere le tue colture libere da contaminanti biologici e chimici.

Poca crescita cellulare

È frustrante quando le cellule in coltura, che altrimenti sembrano sane, non riescono a raggiungere la confluenza. Una volta esclusi i contaminanti, alcuni possibili ostacoli al raddoppio delle cellule sono:

• Condizioni e qualità dei terreni di coltura/congelamento
• Qualità e idoneità applicativa degli integratori
• Numerazione cellulare imprecisa durante il congelamento o il passaggio

Quando le cellule in coltura sembrano sane non riescono a raggiungere la confluenza/ul>

Quando le cellule sembrano vitali ma non riescono a espandersi, imparare cosa si può fare per migliorare le condizioni di coltura per una crescita ottimale prima di tornare all'azoto liquido.

Distacco di fenotipi cellulari aderenti

Le cellule aderenti possono staccarsi spontaneamente in coltura, singolarmente o in fogli. Quando le colture aderenti non rimangono tali, sapete cosa controllare e come ripristinare la coesione nella coltura.

Aggregazione delle cellule

Le cellule in sospensione imitano le condizioni in vivo come singoli individui. Quando le cellule iniziano ad agglomerarsi, ciò può essere dovuto agli acidi nucleici appiccicosi, presenti nei terreni di coltura quando le colture sono stressate. Cosa si nasconde nei terreni di coltura che può causare l'agglomerazione delle cellule? Leggi di più qui su come bandire l'agglomerazione dalle colture.

Morte cellulare in coltura

Quando le cellule muoiono in coltura, occorre innanzitutto escludere la contaminazione con microrganismi. Altri fattori che possono contribuire alla scarsa salute delle cellule o a un comportamento non coerente con il fenotipo sono:

• Condizioni di stock congelato
• Numero di passaggi cellulari/sovraffollamento
• Stress ambientale
• Sovradigestione con enzimi di dissociazione

Attrezzature adeguate, reagenti qualificati e protocolli esperti sono la chiave per risolvere i risultati inattesi delle colture cellulari.

Precipitati nei terreni di coltura

Se non si tratta di contaminazione, il particolato nella coltura ha spesso una spiegazione inorganica. Comprendete i costituenti bilanciati dei tamponi e dei terreni di coltura e apprendete di più su come mantenere in sospensione i costituenti dei terreni di coltura.