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Western-Blot-Stripping-Puffer auf Detergensbasis

Das Strippen und erneute Testen eines Western Blots ermöglicht die Schonung der Proben sowie eine schnelle Korrektur oder Anpassung der Antikörperkonzentration und der Inkubationszeit. Diese Anleitung beschreibt die Herstellung einer Stripping-Lösung für den Western Blot, bei der das Tensid Natriumdodecylsulfat (SDS) und das Reduktionsmittel β-Mercaptoethanol (BME) zum Entfernen von Antikörpern und chemilumineszenten oder fluoreszierenden Nachweisreagenzien verwendet werden.

Dieser Rechner ermöglicht die genaue Herstellung dieser detergensbasierten Western-Blot-Stripping-Lösung für jedes beliebige Volumen in Millilitern. Geben Sie das gewünschte Volumen ein, klicken Sie auf die Schaltfläche „BERECHNEN“, und die Tabelle wird mit den benötigten Mengen der einzelnen Komponenten ausgefüllt.

Rezeptrechner für Western-Blot-Stripping-Lösungen auf Detergensbasis

100 mL Recipe Desired Volume: mL    
20 mL of 10% SDS (71736)   mL of 10% SDS
12.5 mL of 0.5 M Tris-HCl pH 6.8 (FW 157.60)    mL of 0.5 M Tris HCl pH 6.8
0.8 mL of β-mercaptoethanol (63689)   mL of β-mercaptoethanol
Adjust final volume to 100 mL with Milli-Q® Water Adjust final volume to   mL with Milli-Q® Water
  Procedure
 
  1. In a fume hood, place the blot in detergent stripping buffer and incubate with agitation for 30 minutes at 50 °C.
  2. Place the blot in 1X PBS and agitate for 10 minutes. Repeat with fresh buffer.
  3. Optional: Repeat the initial detection protocol (omitting the primary antibody step) to make sure that the antibodies have been inactivated or removed from the membrane.
  4. Place the blot in fresh 1X PBS and agitate for 10 minutes.
  5. Proceed to the blocking step for the next round of immunodetection.
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