CELLPRO-RO

Reagente WST-1 di proliferazione cellulare

suitable for protein quantification, suitable for cell analysis, detection, solution

• Sinonimo/i: reagente di proliferazione cellulare, wst-1
• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 12352200

Proprietà

• form: solution
• usage: sufficient for ≤2,500 tests (11644807001), sufficient for ≤800 tests (05015944001)
• packaging: bottle of 25 mL (11644807001), bottle of 8 mL (05015944001)
• manufacturer/tradename: Roche
• storage condition: protect from light
• technique(s): protein quantification: suitable
• optimum pH: 8.0(for physiological conditions our product is buffered pH 7.3)
• λmax: 440-480 nm
• application(s): cell analysis; detection
• detection method: colorimetric
• storage temp.: −20°C

Descrizione

General description

Contenuto
Soluzione pronta all′uso contenente WST-1 e un reagente elettrofilo.

Determinazione colorimetrica (basata su WST-1) per la quantificazione non radioattiva della proliferazione delle cellule, della vitalità cellulare e della citotossicità.

La proliferazione cellulare richiede la replicazione del DNA genomico. Perciò, il monitoraggio della sintesi del DNA oltre ad essere utile negli studi sulla regolazione di questo importante processo biologico, è un parametro indiretto della proliferazione cellulare. La [³H]-timidina è tradizionalmente usata per marcare il DNA di cellule in replicazione. Per ovviare agli svantaggi connessi con l′uso della [³H]-timidina sono stati sviluppati metodi alternativi non radioattivi basati sulla 5-bromo-2′-deossiuridina (BrdU). L′uso della chemiluminescenza aumenta la sensibilità e allarga l′intervallo di misura.

Application

Il reagente di proliferazione WST-1 è usato per la quantificazione spettrofotometrica non-radioattiva della prolificazione cellulare e la vitalità in popolazioni cellulari usando il formato piastra a 96 pozzetti. Misura della proliferazione cellulare in risposta a fattori di crescita, citochine, mitogeni e nutrienti.

• Analisi di composti citotossici e citostatici come i farmaci contro il cancro e altri composti farmaceutici.
• Rilevazione di anticorpi inibitori di crescita e mediatori fisiologici.

Biochem/physiol Actions

Il sale di tetrazolio stabile WST-1 viene scisso producendo formazano solubile attraverso un complesso meccanismo cellulare che ha luogo primariamente sulla superficie delle cellule. Questa bioriduzione dipende essenzialmente dalla produzione di NAD(P)H nelle cellule vitali durante la glicolisi. Pertanto, la quantità di formazano prodotta è direttamente correlata al numero di cellule metabolicamente attive della coltura.
Le cellule cresciute in una piastra di coltura a 96 pozzetti vengono incubate col reagente WST-1 per 0,5 - 4 ore. Dopo questo tempo di incubazione, si quantifica il formazano prodotto con uno spettrofotometro a scansione per piastre multipozzetto (lettore ELISA). L′assorbanza misurata è direttamente proporzionale al numero di cellule vitali.
I saggi per la determinazione della proliferazione e della vitalità cellulare sono particolarmente importanti per le applicazioni di routine della biologia cellulare. I sali di tetrazolio (es, MTT, XTT, WST-1) sono particolarmente utili per questo tipo di analisi. I sali di tetrazolio vengono scissi con generazione di formazano dal sistema di reduttasi succinato-tetrazolio (EC 1.3.99.1) che fa parte della catena respiratoria dei mitocondri ed è attivo soltanto in cellule con metabolismo intatto.

Features and Benefits

• Comodo: approfitta di un reagente pronto all′uso.
• Facile e sicuro: evita isotopi radioattivi, stadi di lavaggio e reagenti aggiuntivi.
• Accurato: Le misure di assorbanza sono strettamente correlate al numero delle cellule.
• Sensibile: rileva anche un basso numero di cellule.
• Veloce: processa un alto numero di campioni usando un lettore ELISA multi-pozzetto.

Preparation Note

Concentrazione di lavoro: Per ottenere i migliori risultati, aggiungere 10 μL di reagente WST-1 per pozzetto di proliferazione cellulare alle cellule già coltivate in 100 μL per pozzetto (diluizione finale 1:10).
Usando il volume 100 μL per pozzetto di coltura cellulare, un flaconcino basterà per portare avanti 2500 prove (25 micropiastre).
Notare: Se le cellule sono coltivate in 200 μL per pozzetto , aggiungere 20 μL per pozzetto di Reagente di proliferazione WST-1.
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): Da 2 a 8 °C
Nota: Quando dopo lo scongelamento si osservassero precipitati o torbidità scaldare la soluzione a 37 °C per 2-10 minuti agitando per sciogliere i precipitati. Si sconsiglia la centrifugazione perché la concentrazione attiva diminuisce. Dopo essere stato sciolto il reagente WST-1 può essere usato senza limitazioni. Si prega di stoccare in questo modo:
Una volta scongelato conservare per quattro settimane a temperature da 2 a 8 °C, al riparo dalla luce. Tuttavia va notato che la soluzione potrebbe diventare viscosa. Nel caso, scaldare la soluzione a 37 °C per 2-10 minuti come sopracitato.

Stoccaggio a lungo termine
Per stoccare a lungo, aliquote di WST-1 si possono conservare in provette di plastica a temperature da -15 a -25 °C fino alla data di scadenza.

Other Notes

Esclusivamente per ricerche life science. Non usare in procedure diagnostiche.

Informazioni sulla sicurezza

• Classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: nwg
• Punto di infiammabilità (°F): No data available
• Punto di infiammabilità (°C): No data available