COLLD-RO

Collagenasi D

from Clostridium histolyticum

• UNSPSC Code: 12352204
• Numero CE: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Biological source: Clostridium histolyticum
• Concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)

Proprietà

• biological source: Clostridium histolyticum
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• collagenase activity: >0.15 U/mg lyophilizate
• packaging: pkg of 100 mg (11088858001), pkg of 2.5 g (11088882001), pkg of 500 mg (11088866001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)
• technique(s): tissue processing: suitable
• color: light brown
• optimum pH: 6.0-8.0
• solubility: water: soluble
• NCBI accession no.: WP_171012037
• application(s): cell analysis
• foreign activity: Clostripain 0.060 U/mg, Trypsin <0.2 U/mg (with BAEE), Proteases ≤60 U/mg ( Azocoll)
• storage temp.: 2-8°C

Descrizione

General description

La collagenasi D è preparata da colture di Clostridium histolyticum per filtrazione, precipitazione con solfato di ammonio, dialisi e liofilizzazione.

Application

La collagenasi da Clostridium histolyticum è molto usata per la disgregazione di vari tipi di tessuti (per esempio, polmonare, cardiaco, muscolare, osseo, adiposo, epatico, renale, cartilagineo, delle ghiandole mammarie, placentari, dei vasi sanguigni, cerebrale, tumorale, del cordone ombelicale) e per la preparazione di sospensioni monocellulari per costituire sistemi di coltura di cellule primarie. La Collagenasi D è raccomandata quando la funzionalità e integrità delle proteine sulla superficie della cellule sono importanti.
La collagenasi da Clostridium Roche è stata usata per preparare cellule da molti tipi di tessuti come epatociti, adipociti, isole pancreatiche, cellule dei muscoli e endoteliali ecc.. Tuttavia la capacità di ogni lotto di enzima di attaccare un particolare tessuto si deve determinare empiricamente.

Biochem/physiol Actions

La collagenasi degrada il collagene nativo. Clostripaina, enzimi simil-tripsina e proteasi neutre degradano anche altre proteine.

Features and Benefits

Contenuto
Liofilizzato, non sterile

Physical form

Liofilizzato, non sterile.

Preparation Note

Attivatore: Ca²⁺
Concentrazione di lavoro: 0,5 - 2,5 mg/mL
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): da -15 a -25 °C
Roche raccomanda di ricostituire solo la quantità di liofilizzato da usarsi immediatamente. La soluzione ricostituita può essere conservata a temperature da -15 a -25°C al massimo per una settimana. Si raccomanda di evitare cicli ripetuti di congelamento/scongelamento perché l′attività diminuisce dopo la ricostituzione.

Inibitori
Inibitori della collagenasi: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoetanolo
La collagenasi non viene inibita dal siero.
Inibitori della clostripaina: TLCK
Inibitori della tripsina: aprotinina, inibitore della tripsina (albume, soia)

Attività enzimatica
Attività della collagenasi: >0,15 U/mg (secondo Wünsch) (+25 °C, 4-fenil-azobenzil-ossicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg come substrato)
Attività enzimatiche contaminanti: tripsina, clostripaina e attività proteolitica totale
La collagenasi D mostra attività collagenasica da normale ad alta e bassissima attività triptica (normalmente <0,2 unità/mg con BAEE come substrato).

Ricostituzione in qualsiasi soluzione salina bilanciata (ad es., HBSS)

Tenere al riparo dalla luce.

Other Notes

Esclusivamente per ricerche life science. Non usare in procedure diagnostiche.

La collagenasi Roche è stimata in unità Wünsch (1 μmoli di prodotto formate per minuto a +25 °C con substrato Wünsch).
Spesso l′attività della collagenasi è data in unità Mandl (1 μmoli di leucina liberate da collagene in 5 ore a +37 °C).
Purtroppo non c′è un fattore di conversione affidabile fra le due unità di attività perché l′unità Mandl dipende in parte dalla concentrazione delle proteasi contaminanti nella preparazione della collagenasi e questa è una variabile indefinibile. Una preparazione di collagenasi più pura darebbe in realtà una attività specifica minore in unità Mandl rispetto ad una preparazione grezza. Le preparazioni da Clostridium in genere mostrano fattori di conversione di circa 1:1800 (ad es., un particolare lotto di collagenasi da Clostridium conteneva circa 0,15 U/mg Wünsch e 250 U/mg Mandl).

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS07,GHS08
• Parola di avvertenza: Danger
• Avvertenze di sicurezza: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organi bersaglio: Respiratory system
• Classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Che succede?: WGK 1
• Punto di infiammabilità (°F): does not flash
• Punto di infiammabilità (°C): does not flash
• Codici di pericolo: H315,H319,H334,H335