For efficient nucleic acid removal using Benzonase® (E1014), the recommended ratio depends on the concentration of DNA or RNA in the sample. A typical starting point is 25 U/mL of Benzonase® for reducing nucleic acid content in lysates, which corresponds to approximately 1 unit of enzyme per 37 µg of DNA under optimal conditions. For lower concentrations of DNA or RNA, as little as 9 U/mL may achieve 99% removal, but higher concentrations, e.g., 90 U/mL, ensure faster and more complete degradation. Optimal activity requires 1–2 mM magnesium ions, a pH of 8.0–9.2, and incubation at 37°C. Adjustments may be needed for sample-specific factors such as buffer composition and nucleic acid load.
E1014
Nucleasas Benzonase®
Benzonase® Nuclease
≥250 units/μL, ≥90% (SDS-PAGE), recombinant, expressed in E. coli, buffered aqueous glycerol solution
Sinónimos:
Endonucleasas from Serratia marcescens
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About This Item
Número de CAS:
Número MDL:
Código UNSPSC:
12352204
NACRES:
NA.54
Productos recomendados
origen biológico
Serratia marcescens
Nivel de calidad
recombinante
expressed in E. coli
Ensayo
≥90% (SDS-PAGE)
Formulario
buffered aqueous glycerol solution
mol peso
30 kDa
concentración
≥250 units/μL
aplicaciones
research use
actividad extraña
protease, essentially free
Condiciones de envío
wet ice
temp. de almacenamiento
−20°C
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Descripción general
La nucleasa Benzonase® es una endonucleasa genotecnológica muy eficiente procedente de Serratia marcescens[1]. Este dímero proteico con dos enlaces disulfuro esenciales [2] es capaz de atacar y degradar todas las formas de ADN y ARN (monocatenarias, bicatenarias, lineales y circulares) en una amplia variedad de condiciones de funcionamiento. La nucleasa Benzonase® es capaz de eliminar los ácidos nucleicos y potenciar la pureza y la calidad de las muestras proteicas.
Aplicación
La nucleasa Benzonase® se ha utilizado: como un componente del amortiguador C de lisis en frío para digerir el ADN y el ARN y facilitar así la liberación completa de todas las proteínas nucleares[3] en el paso de inmunoprecipitación para liberar los complejos proteicos del nucleoplasma y la cromatina[4] como un suplemento en RIPA para fraccionar las células SHSY5Y destinadas a inmunoprecipitación[5] para eliminar los ácidos nucleicos residuales de las raíces aórticas en el método de descelularización[6]
Utilizado para eliminación de los ácidos nucleicos de las muestras proteicas.
Acciones bioquímicas o fisiológicas
Digiere el ADN y el ARN nativos o desnaturalizados por calor.
La nucleasa Benzonase® puede digerir por completo los ácidos nucleicos en oligonucleótidos de 3 a 5 bases de longitud terminados en 5′-monofosfato, lo que la convierte en la herramienta ideal para separar los ácidos nucleicos de las proteínas recombinantes y para aplicaciones que requieran una digestión completa de los ácidos nucleicos. Además de reducir la viscosidad en los extractos de proteínas y evitar la aglutinación celular, el pretratamiento de muestras proteicas con las nucleasas Benzonase® puede mejorar significativamente su resolución en la electroforesis bidimensional en gel al eliminar cualquier ácido nucleico unido. Esta enzima versátil puede digerir el ADN y el ARN nativos o desnaturalizados por calor con su pH de actividad enzimática óptimo que oscila entre 8,0 y 9,2. La nucleasa Benzonase® elimina con eficacia el ADN huésped de las muestras de microbioma. En muchos casos, las muestras de microbioma (como la saliva o la piel) tendrán un elevado porcentaje de ADN del huésped que interfiere en los resultados posteriores. Nuestros expertos demuestran que la reducción del ADN del huésped disminuye el coste de la secuenciación al tiempo que aumenta y mejora los datos. Encontrará los datos experimentales en el artículo técnico - Benzonase® Nuclease for Microbiome Workflows
Características y beneficios
- Eliminación del ADN del huésped en muestras de microbioma.
- Digestión eficaz del ácido nucleico en una variedad de procedimientos de trabajo.
- Reducción de la viscosidad durante la extracción de proteínas.
Definición de unidad
Una unidad digerirá el ADN de esperma de salmón tratado con ultrasonidos a oligonucleótidos solubles en ácido equivalentes a ΔA260 de 1,0 en 30 minutos a pH 8,0 a 37 °C (volumen de reacción 2,625 ml).
Forma física
Disolución en glicerol al 50% que contenga Tris HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl2 2 mM y NaCl 20 mM.
Información legal
La nucleasa Benzonase® es suministrada por Merck KGaA, Darmstadt, Alemania y sus filiales.
Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Código de clase de almacenamiento
10 - Combustible liquids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 1
Punto de inflamabilidad (°F)
Not applicable
Punto de inflamabilidad (°C)
Not applicable
Equipo de protección personal
Eyeshields, Gloves
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Maina M.B., et al.
Acta Neuropathologica Communications, 6(70) (2018)
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Granath C, et al.
BioResearch Open Access, 9(1) (2020)
P Friedhoff et al.
Protein expression and purification, 5(1), 37-43 (1994-02-01)
Overproduction of the extracellular Serratia marcescens nuclease in Escherichia coli results in aggregation and sequestration of a large amount of the protein in inclusion bodies. Only a relatively small amount is secreted into the medium from which it can be
Artículos
Benzonase® Nuclease for reducing host DNA in microbiome workflows and enhancing taxa identification.
This page lists nine frequently asked questions and answers about Benzonase® Nuclease.
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Benzonase®endonuclease efficiently removes nucleic acid contaminants from viral production, crucial for cell and gene therapies and vaccines.
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Hi, what is the ratio of E1014 : DNA and E1014 : RNA for an efficient acid nucleic removal?
1 answer-
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How many ul does it contain? What kind of Unit is KU?
1 answer-
The unit activity of this product is lot-specific and reported in the product Certificate of Analysis. The minimum activity is 250 units per microliter. The KU value represents 1000 units. For example, a 20 KU package size represents 20,000 units. Please see the link below to review a sample or lot-specific Certificate:
https://www.sigmaaldrich.com/product/sigma/e1014#product-documentationHelpful?
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Hi, for protein purification from E. coli cells, how much is the working concentration range for Benzonase nuclease (≥250 units/μL)? Thank you
1 answer-
The recommended starting concentration for Benzonase nuclease is 25 units per milliliter of cell lysate.
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Hello, I plan to do proteomic for protein. When I add RIPA buffer to isolate the protein, I need to remove the DNA and RNA inside. When should I add E1014? Together with RIPA or after it?
1 answer-
Concentrations greater than 1 mM EDTA will inhibit Benzonase activity, and RIPA buffer recipes typically contain EDTA at higher concentrations than 1 mM. Therefore, Benzonase should be used after removing EDTA from the lysed sample or consider using a different lysis solution that does not include EDTA in the formulation.
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What is the storage temperature range for E1014? There is only a specified storage temperature, and not a range.
1 answer-
This product is stored at freezer temperature, which is typically -20°C. An excepted range is -15 - -20°C.
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