PVUI-RO

Pvu I

from Proteus vulgaris

• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• Specific activity: 5000 units/mL
• Biological source: bacterial (Proteus vulgaris)

Właściwości

• biological source: bacterial (Proteus vulgaris)
• form: solution
• specific activity: 5000 units/mL
• packaging: pkg of 100 U (10650137001 [5 U/μl]), pkg of 500 U (10650129001 [5 U/μl])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 37 °C optimum reaction temp.
• color: colorless
• pH: 7.5-7.6 (37 °C)
• solubility: water: miscible
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): life science and biopharma; sample preparation
• foreign activity: Non specific endunuclease <10%, Non specific endunuclease, none detected
• storage temp.: −20°C

Opis

Biochem/physiol Actions

Liczba miejsc rozszczepienia na różnych DNA

• λ: 3
• φX174: 0
• Ad2: 7
• M13mp7: 1
• pBR322: 1
• pBR328: 1
• pUC18: 2
• SV40: 0

Pvu I rozpoznaje sekwencję CG°AT↓ ^*CGi generuje fragmenty z końcami 3′.
Miejsca rozpoznawania: CG°AT*CG
CG°AT*CG
Miejsce restrykcji: CG°AT↓*CG
CG°AT↓*CG
Inaktywacja termiczna: Brak inaktywacji Pvu I po inkubacji w 65 °C przez 15 minut.

Preparation Note

Nie przechowywać w temperaturze poniżej -25°C.

Analysis Note

Kompatybilne końce
Pvu I generuje końce, które są kompatybilne z fragmentami generowanymi przez Pac I.

Izoschizomery
Pvu I jest izoschizomerem do BspC I i Xor II.

Wrażliwość na metylację
Rozszczepienie Pvu I nie jest hamowane przez nakładającą się metylację dam w miejscu wskazanym (°) na sekwencji rozpoznawania, ale fragmenty Pvu I DNA izolowane ze szczepów dam+ nie są tak łatwo religowane jak te izolowane ze szczepów dam-. Pvu I jest hamowany przez 5-metylocytozynę we wskazanym miejscu (°) i przez 4-metylocytozynę.

SuRE/Cut Buffer System
Bufor pogrubiony jest zalecany dla optymalnej aktywności

• A: 50-75%
• B: 75-100%
• H: 100%
• L: 25-50%
• M: 50-75%

Temperatura inkubacji
+37°C

Definicja jednostki
Jedna jednostka to aktywność enzymu, która całkowicie rozszczepia 1μg λDNA w ciągu 1 godziny w temperaturze +37°C w całkowitej objętości 25μl SuRE/Cut Buffer H.

Inaktywacja termiczna
Pvu I nie może być inaktywowany termicznie przez inkubację przez 15 minut w temperaturze +65°C.

Testy PFGE
Pvu I został przetestowany w elektroforezie pulsacyjnej (na chromosomach bakteryjnych). Do rozszczepiania genomowego DNA(E. coli C 600) osadzonego w agarozie do analizy PFGE zalecamy 10U enzymu/μg DNA i 4-godzinny czas inkubacji.

Test ligacji i ponownego cięcia
Fragmenty Pvu I uzyskane przez całkowite trawienie 1 μg DNA pBR322 są ligowane 1U T4 DNA Ligase w objętości 10 μl przez inkubację przez 16 godzin w temperaturze +4 ° C w 66 mM Tris-HCl, 5 mM _MgCl2, 5 mM Dithiothreitol, 1 mM ATP, pH 7.5 (w temperaturze +20°C), co skutkuje >80% odzyskiem 1 μg fragmentów DNA pBR322.
Późniejsze ponowne cięcie za pomocą Pvu I daje >95% typowego wzoru fragmentów DNA pBR322 × Pvu I.

Aktywność w buforze PCR: <5%

Względna aktywność w mieszaninie PCR (bufor Taq DNA Polymerase) jest mniejsza niż 5%. Mieszanina PCR zawierała λDNA, startery, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3, 20 °C), 50 mM KCl, 1,5 mM _MgCl2, 200 μM dNTPs, 2,5 U polimerazy Taq DNA. Mieszaninę poddano 25 cyklom amplifikacji.

Absence of nonspecific endonuclease activities
1μg λDNA is incubated for 16hours in 50μl SuRE/Cut Buffer H with an excess of Pvu I. The number of enzyme units which do not change the enzyme-specific pattern is stated in the certificate of analysis.

Absence of exonuclease activity
Approximately 5μg [3H] labeled calf thymus DNA are incubated with 3μl Pvu I for 4hours at +37°C in a total volume of 100μl 50mM Tris-HCl, 10mM MgCl₂, 1mM Dithioerythritol, pH approximately 7.5. Under these conditions, no release of radioactivity is detectable, as stated in the certificate of analysis.

Other Notes

Jedna jednostka to aktywność enzymu, która całkowicie rozszczepia 1 μg DNA w ciągu jednej godziny w temperaturze +37 °C w całkowitej objętości 25 μl (1x) SuRE/Cut Buffer H.

For life science research only. Not for use in diagnostic procedures.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Tylko elementy zestawu

• Enzyme Solution
• SuRE/Cut Buffer H 10x concentrated

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash