[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty ProduktyZastosowaniaUsługiZasobyWsparcie [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Testy multipleksowe MILLIPLEX® dla urządzeń Luminex®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/protein-biology/immunoassay-platform-solutions/milliplex-multiplex-assays-for-luminex-technology)Wskazówki i porady: Ustawienia sprzętu i analiza danych dla testów multipleksowych MILLIPLEX® # Wskazówki i porady: Ustawienia sprzętu i analiza danych dla testów multipleksowych MILLIPLEX® Potrzebujesz porady dotyczącej wyboru ustawień sprzętu lub przeprowadzania analizy danych podczas wykonywania testów multipleksowych MILLIPLEX®? Zapoznaj się z poniższymi poradami i wskazówkami ekspertów, w tym ustawieniami urządzeń Luminex® multiplex, ogólnymi uwagami dotyczącymi urządzeń i wskazówkami dotyczącymi analizy danych. __Przegląd sekcji__ - [Ogólne ustawienia urządzeń Luminex®. Multiplex](https://www.sigmaaldrich.com#general) - [Running MILLIPLEX® Kits on Other Luminex® Instruments](https://www.sigmaaldrich.com#running-milliplex) - [Instrument Considerations for Running MILLIPLEX® Assays](https://www.sigmaaldrich.com#instrument-considerations) - [Wskazówki dotyczące analizy danych](https://www.sigmaaldrich.com#data-analysis) - [Informacje dotyczące zapytań](https://www.sigmaaldrich.com#request-info) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Ogólne ustawienia sprzętu dla urządzeń Luminex® Multiplex Instruments .Poniżej opisano wskazówki dotyczące ustawień sprzętu dla [Platformy multipleksowe Luminex®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/luminex-multiplexing-platforms-comparison), w tym xMAP® INTELLIFLEX, Luminex® 200™, FLEXMAP 3D® i MAGPIX®. - W przypadku systemu MAGPIX® należy wybrać ustawienie "rozszerzone uruchamianie" zamiast zwykłego uruchamiania. - Zapewni to prawidłową kalibrację i czyszczenie przed uruchomieniem testu. - Praca z surowicą może być bardziej "lepka" niż w przypadku innych płynów biologicznych i może wpływać na wydajność urządzenia, chyba że zostanie ono odpowiednio wyczyszczone. - Eksperci Luminex® mogą dostarczyć zalecany protokół konserwacji. - Upewnij się, że sonda igłowa jest czysta. Można to osiągnąć poprzez sonikację i/lub płukanie alkoholem. - Wysokość sondy: - __xMAP® INTELLIFLEX System:__ Dostosuj wysokość sondy w oparciu o typ używanej płytki i umieść dysk wyrównujący lub kulę wyrównującą w studzience zgodnie z protokołem zalecanym przez ekspertów Luminex®. - __System Luminex® 200™:__ Dostosuj wysokość sondy zgodnie z protokołami zalecanymi przez ekspertów Luminex® do płytki stałej zestawu przy użyciu 3 dysków wyrównujących. - __System FLEXMAP 3D®:__ Użyj narzędzia do regulacji wysokości sondy (biała płytka), które ma miejsca zarówno dla płytek 384-dołkowych, jak i 96-dołkowych.     - Wymiary studzienki płytki zestawu 96-dołkowego (3,5 mm) wymagają użycia miejsca F12 na białym narzędziu do regulacji wysokości sondy. - __System MAGPIX®:__ Dostosuj wysokość sondy zgodnie z protokołami zalecanymi przez ekspertów Luminex® do płytki stałej zestawu za pomocą 2 dysków wyrównujących. - Notowanie dołków kontrolnych na urządzeniu może być żmudne, z dużą ilością ręcznego wpisywania. - Możliwe jest wprowadzenie dołków jako niewiadomych zamiast kontroli, aby uniknąć wpisywania adnotacji dla kontroli, a następnie porównywania z wykresem później. - Ważne jest, aby używać ustawień bramki określonych przez producenta. - Oprogramowanie do akwizycji xPONENT® 200™ systemu Luminex® ma dwie funkcje: jedną dla kulek magnetycznych (MagPlex®) i jedną dla kulek niemagnetycznych (MicroPlex®). - Upewnij się, że wybrano kulki MagPlex®, aby uruchomić zestawy multipleksowe MILLIPLEX®. - Jeśli wybrano niewłaściwy typ, nie trzeba ponownie odczytywać płytki. Partia może zostać odtworzona z poprawionymi ustawieniami protokołu. - W celu uzyskania informacji na temat oprogramowania xPONENT® i zamówienia szablonów oprogramowania [skontaktuj się z działem pomocy technicznej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/support/customer-support) lub specjalistą ds. sprzedaży. - Jeśli płytka nie może zostać uruchomiona natychmiast (w ciągu 4 godzin) (np, musi zostać przewieziona do innego miejsca w celu przeprowadzenia testu), należy zawiesić próbkę w płynie Sheath Fluid PLUS lub Drive Fluid PLUS lub buforze testowym. - Dziesięć płytek można uruchomić za pomocą jednej butelki płynu Drive Fluid PLUS dla systemu MAGPIX®. - Aby zmienić krzywą standardową, na przykład z krzywej 7-punktowej na 8-punktową, wystarczy utworzyć nowy protokół i odtworzyć partię. [](https://www.sigmaaldrich.com) ## Uruchamianie zestawów MILLIPLEX® na innych urządzeniach Luminex® - Systemy Luminex® 200™, FLEXMAP 3D® i MAGPIX® z oprogramowaniem xPONENT® oraz systemy xMAP® INTELLIFLEX z oprogramowaniem INTELLIFLEX są wymagane do przeprowadzenia testu multipleksowego MILLIPLEX®. - Jeśli chcesz wypróbować zestaw przed zakupem urządzenia, poproś specjalistę ds. sprzedaży o przeprowadzenie demonstracji przy użyciu platform Luminex® i zestawów MILLIPLEX®. - Testów z użyciem kulek magnetycznych nie można wykonywać na żadnych urządzeniach wykorzystujących oprogramowanie Luminex® IS 2.3 lub Luminex® 1.7. - Ponieważ wszystkie urządzenia Luminex® (xMAP® INTELLIFLEX, Luminex® 200™, FLEXMAP 3D® i MAGPIX® są zbudowane w oparciu o najnowocześniejsze technologie./sup>) są budowane przez Luminex® Corporation, zestawy MILLIPLEX® mogą być uruchamiane na każdej z tych maszyn, niezależnie od nazwy nadanej maszynie przez partnera biznesowego Luminex®. - Jeśli używane są urządzenia Luminex® z oprogramowaniem innym niż xPONENT® (Bio-Plex® Manager™, MasterPlex®, STarStation, LiquiChip, LABScan™ 100), należy postępować zgodnie z instrukcjami urządzenia dotyczącymi ustawień bramki i dodatkowymi specyfikacjami producentów oprogramowania do odczytu testów z użyciem kulek magnetycznych Luminex®. - Aby odczytać zestaw MILLIPLEX® na urządzeniu Bio-Plex®, wybierz 5K-25K dla kulek magnetycznych, w zależności od wersji oprogramowania Bio-Plex® Manager™. [](https://www.sigmaaldrich.com) ## Instrument Considerations for Running MILLIPLEX® Assays Prawidłowe uruchamianie i wyłączanie systemu zapewni jego długą żywotność. Instrukcje dotyczące systemów xMAP® INTELLIFLEX, Luminex® 200™ i MAPGIX® znajdują się w podręcznikach użytkownika tych systemów: - xMAP® INTELLIFLEX User Manual, strona 40 - Luminex® 200™. Podręcznik użytkownika, sekcja 3, strona 17 - FLEXMAP 3D® Podręcznik użytkownika, strona 30 - MAGPIX® Skrócona instrukcja obsługi 4.2. Krótkotrwałe czyszczenie zapobiegnie zatkaniu spowodowanemu próbką, podczas gdy czyszczenie długoterminowe jest ważne, aby zapewnić, że płyn Sheath Fluid PLUS lub Drive Fluid PLUS nie wyparuje i nie skrystalizuje się. ### Przygotowanie - Sprawdź sondę i włóż ją do czytnika. Ustawić wysokość sondy. - Napełnić zbiorniki (woda Milli-Q®, 70% EtOH, 0,1M NaOH). - Ożywić urządzenie: ożywić po przechowywaniu, codzienne uruchamianie. - Kalibracja i weryfikacja urządzenia: instalacja systemu. - Przeczytaj cały protokół zestawu. - Pobierz "[Materiały wymagane, ale niedostarczone](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/tips-and-tricks-decide-which-multiplex-assay-fits-your-research)". - Potwierdź dokładność pipet. ### Test - Postępuj zgodnie z protokołem zestawu. - Ustaw projekt eksperymentu w oprogramowaniu do akwizycji. - Uruchom test. - Uruchom "Post Batch Routine". ### Wyłączenie - __Codzienne wyłączenie__ (na noc): - Uruchom "Clean Routine". - Uruchom "Clean Routine". - Uruchom "Daily Shutdown Routine". - Wyjmij sondę i wyczyść ją w sonikacyjnej łaźni wodnej. - __Długotrwałe wyłączenie__ (dłużej niż tydzień): - Uruchom "Procedurę czyszczenia" wiele razy. - Run "Prepare for Storage" part 1. - Prime multiple times with Milli-Q® water (use a empty sheath fluid container). - Run "Prepare for Storage" part 2. - Wyjmij sondę i wyczyść ją w sonicznej łaźni wodnej. [](https://www.sigmaaldrich.com) ## Wskazówki dotyczące analizy danych ### Liczenie kulek Zalecamy liczenie 50 kulek podczas wykonywania testów MILLIPLEX®. - Według ekspertów Luminex® należy zliczyć co najmniej 35 kulek na region. - Mniej niż 35 kulek może spowodować przesunięcie wartości MFI (Median Fluorescence Intensity) populacji kulek. - MFI nie zmieni się dla liczby kulek ≥35. - Nie martw się, jeśli w jednym regionie jest 35 kulek, a w innych 400. Nie będzie to miało wpływu na MFI. ### Procentowy współczynnik zmienności (%CV) - Wysoki %CV dla wzorców lub próbek może być spowodowany niską liczbą kulek. - Nasz docelowy %CV wewnątrz testu wynosi < 15%, a nasz docelowy %CV między testami wynosi < 20%. ### Obliczanie dolnej granicy oznaczalności (LLOQ) i górnej granicy oznaczalności (ULOQ) - Definiowanie LLOQ i ULOQ wymaga wąskiej krzywej standardowej (np, seryjne rozcieńczenie 1:2 lub 1:3 do punktu, w którym osiąga się nasycenie na obu końcach). - Wybierz najniższe i najwyższe punkty krzywej standardowej, które mają odzysk +/- 20%. - Sprawdź, czy jest to LLOQ i ULOQ, wykonując 5 testów z LLOQ i ULOQ jako próbkami względem krzywej przy użyciu współczynnika seryjnego rozcieńczenia testu, w którym najniższy standard jest poniżej LLOQ, a najwyższy standard jest powyżej ULOQ. - Precyzja wewnątrz testu powinna mieścić się w granicach 20% dla próbek LLOQ i ULOQ. ### Wydajność krzywej/Dopasowanie - Punkty standardowe %CV powinny wynosić <15%. - Wysokie wartości %CV wskazują na zastosowanie niewłaściwej techniki podczas wykonywania rozcieńczeń krzywej standardowej. Przykłady niewłaściwej techniki obejmują: - Niewirowanie między probówkami. - Niewirowanie podczas ładowania płytki. - Nie pipetowanie równych ilości do płytki. - Im niższe stężenia analitów, tym wyższe są %CV. W przypadku nowych użytkowników poprawia się to z czasem i praktyką. - W przypadku punktów standardowych, które mają wysokie %CV, próbki w tym zakresie krzywej powinny być interpretowane z ostrożnością. - Alternatywnie, punkt standardowy lub jeden z dołków replikacyjnych może być oznaczony / zamaskowany, chociaż może być trudno zdecydować, który dołek oznaczyć, jeśli uruchamiane są tylko duplikaty. ### Odzyskiwanie - Procent odzysku powinien wynosić 100% +/- 30% (standard branżowy), chociaż niektórzy badacze będą mieli własne kryteria akceptacji. - Odzyskiwanie procentowe jest zwykle gorsze na obu krańcach krzywej, ale poprawia się to również z czasem i praktyką. - W przypadku statystyk krzywej należy skupić się na wartości R2, która zbliża się, ale nigdy nie jest równa jedności. (Należy pamiętać, że wartość R2 równa "1" jest widoczna przy zaokrągleniu oprogramowania 0,9999). ### Minimalne/maksymalne wykrywalne stężenie (minDC/maxDC) - Dla wielu testów, minDC/maxDC będzie poza punktami standardowymi (ekstrapolowane) ze względu na dobrą wydajność krzywej i dopasowanie. - Aby uniknąć wyświetlania ekstrapolowanych danych, należy ustawić żądany zakres wykrywania w oprogramowaniu do analizy danych. - Decyzja, czy użyć opcji "Best Fit" vs. 5-parametrowa opcja partii zależy od poziomu komfortu, aby określić, jak właściwe jest "bawienie się" dopasowaniem krzywej w celu znalezienia najlepszego. - Jeśli próbki wykraczają poza zakres dynamiczny testu, należy je dalej rozcieńczyć odpowiednimi matrycami/mediami i powtórzyć test. ### Jak monitorować/uniknąć dryftu od partii do partii - Punkty standardowe MILLIPLEX® utrzymują spójne wartości od partii do partii. - Dryf między partiami jest monitorowany i łagodzony za pomocą porównania pełnej krzywej i porównania względnej siły każdego analitu z partią referencyjną. - Wszystkie dane są kompilowane w jednej bazie danych, a wykresy trendów są przechowywane w naszej dokumentacji. ### Łatwa analiza danych multipleksowych z oprogramowaniem Belysa® Immunoassay Curve Fitting Oferujemy potężne połączenie do analizy danych multipleksowych testów immunologicznych, łącząc nasze [Belysa® Immunoassay Curve Fitting software](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/services/software-and-digital-platforms/belysa-immunoassay-curve-fitting-software) z danymi uzyskanymi za pomocą oprogramowania Luminex® xPONENT®. Oprogramowanie Belysa® umożliwia szybkie i wydajne zarządzanie, śledzenie i analizowanie testów multipleksowych, dając więcej czasu na skupienie się na rozwoju badań. Gromadzenie i analiza danych integruje się płynnie ze wszystkimi urządzeniami Luminex® xMAP®. - __Krok 1__: Przeciągnij i upuść plik .csv uzyskany z oprogramowania do akwizycji xPONENT®. - Oprogramowanie Belysa® akceptuje pliki akwizycji ze wszystkich instrumentów RUO Luminex®. Pliki można przeciągnąć do otwartej przeglądarki, aby otworzyć je na platformie Belysa®. - __KROK 2__: Zbadaj i automatycznie zoptymalizuj dopasowanie krzywej dla swoich danych. - Narzędzia Belysa® przeanalizują surowe dane i przedstawią je użytkownikowi, dodając do krzywej adnotacje z punktami standardowymi, kontrolnymi i próbkami. Dzięki prostej funkcji kreatora oprogramowanie zapewni najlepsze dopasowanie do uzyskanych danych. Dostępna jest również opcja ręcznego dopasowania krzywej. - __Krok 3__: Skanowanie danych w celu zapewnienia higieny replikacji. - Oprogramowanie Belysa® powiadamia użytkownika na dwa sposoby: - Narzędzia Belysa® ostrzegają użytkownika o danych, które znajdują się na dolnym końcu zakresu testu (np, poniżej granicy oznaczalności lub niewykrywalne). - Narzędzia Belysa® sygnalizują również błędy techniczne w teście, zarówno na poziomie surowych danych (takich jak liczba kulek), jak i w obliczonych parametrach (takich jak odzysk lub %CV). - __Krok 4__: Porównanie krzywych standardowych z poprzednim eksperymentem w celu potwierdzenia podobieństwa matematycznego. - Porównanie nachylenia krzywych standardowych między partiami lub seriami zapewnia, że różne zestawy działają jednakowo, zarówno w ramach serii, jak i w trakcie badania podłużnego. Użytkownik najpierw wybiera krzywą do ustalenia jako odniesienie, z którym porównywane są kolejne krzywe testu. Jeśli obliczony współczynnik nachylenia jest równy 1, wówczas krzywe są statystycznie podobne. - __Krok 5__: Eksport danych. - Każdy tryb eksperymentalny w oprogramowaniu oferuje nieco inną strukturę raportu, pojedynczy analit i wiele analitów. Są one dostępne w formacie .csv, .txt, Excel i PDF do przyszłej analizy lub prowadzenia dokumentacji. Dowiedz się więcej o oprogramowaniu Belysa® w naszym [artykuł Monitorowanie odtwarzalności metod immunologicznych](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/protein-biology/immunohistochemistry/monitoring-method-reproducibility-with-belysa-software).[](https://www.sigmaaldrich.com) * * * ## Zapytaj o informacje Masz więcej pytań dotyczących testów multipleksowych MILLIPLEX®? Sprawdź nasze [Pytania](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/protein-biology/immunohistochemistry/milliplex-faq) lub wypełnij formularz klikając na poniższy przycisk.. [Poproś o informacje na temat testów MILLIPLEX®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/campaigns/milliplex-request-info) __Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych.__ __Powiązane artykuły__ - [Wskazówki dotyczące obsługi próbek | Testy MILLIPLEX®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/tips-and-tricks-sample-handling-and-preparation) - [Tips & Tricks | Preparation of Reagents | MILLIPLEX® Assays](https://www.sigmaaldrich.com/PL/en/technical-documents/product-supporting/milliplex/tips-tricks-preparation-of-reagents-milliplex-multiplex-assays) - [Tips & Tricks | Species Cross-Reactivity | MILLIPLEX® Assays](https://www.sigmaaldrich.com/PL/en/technical-documents/product-supporting/milliplex/tips-tricks-species-cross-reactivity) - [Testy multipleksowe sygnalizacji komórkowej | Testy MILLIPLEX®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/cell-signaling-multiplex-assays) - [Wybór platform do testów immunologicznych](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/how-to-select-your-immunoassay-platform) - [Testy multipleksowe cytokin nowej generacji | Testy MILLIPLEX®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/human-cytokine-multiplex-panel) - [Wielokrotne testy immunologiczne | Testy MILLIPLEX®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/immunology-multiplex-assays) - [Przegląd technologii testów multipleksowych Luminex® | Testy multipleksowe MILLIPLEX®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/product-supporting/milliplex/luminex-multiplex-assay-technology) - [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. An unknown error has occured.