缓冲液参考中心

• 精选生物缓冲液的pH范围表（25℃，0.1 M）
• Tris或Trizma^®缓冲液配制–pH值与温度对照表
• 磷酸缓冲液配制（0.2 M溶液）
• 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配制（pH 2.6-7.6）
• 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制（pH 3.0-6.2）
• 乙酸钠-乙酸缓冲液配制（pH 3.7-5.6）
• 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液配制（25℃，pH 5.8-8.0）
• 咪唑-盐酸缓冲液配制（25℃，pH 6.2-7.8）
• 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液配制（pH 9.2-10.8）
• 缓冲液配制算式

选择适合的生物缓冲液

选择缓冲液需考虑pH及pKa要求，pKa是与pH、浓度和温度有关的酸度系数。还需要考虑生物应用的监管或纯度要求。下列表格按pH值和pKa值提供常用缓冲液的配制信息。

除了以下各表之外，我们还开发了多款缓冲液配方计算器，支持各种缓冲液的配制。

凝胶电泳用的TBE和TAE缓冲液配方稍微复杂一些，我们可帮助您选择最适合的缓冲液。

什么是缓冲液级别？

缓冲液级别划分出适合不同研究用途的质量和杂质水平。我们提供的6个级别的缓冲液分别适合常规实验室使用、药物制剂和生产以及其中需要微量金属检测或特别纯度水平的应用。

精选生物缓冲液的pH范围表（25℃，0.1 M）
缓冲液	有效pH范围	pKa (20 °C)	pKa (25 °C)	pKa (37 °C)	试剂级	BioPerformance Certified级别
MES	5.5–6.7	6.16	6.10	5.97	M8250	M2933
Bis-Tris	5.8–7.2	n/a	6.50	6.36	B9754	B4429
ADA	6.0–7.2	6.65	6.59	6.46	A9883	n/a
ACES	6.1–7.5	6.88	6.78	6.54	A9758	A3594
PIPES	6.1–7.5	6.80	6.76	6.66	P6757	P1851
MOPSO	6.2–7.6	n/a	6.90	6.75	M8389	n/a
Bis-Tris丙烷	6.3-9.5	n/a	6.8, 9.0	n/a	B6755	B4679
BES	6.4–7.8	7.17	7.09	6.90	B9879	B4554
MOPS	6.5-7.9	7.28	7.20	7.02	M1254	M3183
TES	6.8-8.2	7.50	7.40	7.16	T1375	T5691
HEPES	6.8-8.2	7.55	7.48	7.31	H3375	H4034
DIPSO	7.0-8.2	n/a	7.60	7.35	n/a	n/a
MOBS	6.9-8.3	n/a	7.60	n/a	M3295	n/a
TAPSO	7.0-8.2	n/a	7.60	7.39	T9269	n/a
Tris或Trizma®	7.0-9.0	8.20	8.06	7.72	T1503	T6066
HEPPSO	7.1-8.5	n/a	7.80	6.66	n/a	n/a
POPSO	7.2-8.5	n/a	7.80	7.63	P3405	n/a
TEA	7.3-8.3	n/a	7.80	n/a	n/a	n/a
EPPS	7.3-8.7	n/a	8.00	n/a	E9502	E0276
Tricine	7.4-8.8	8.16	8.05	7.80	T0377	T5816
双甘肽	7.5-8.9	n/a	8.20	n/a	G1002	G3915
Bicine	7.6-9.0	8.35	8.26	8.04	B3876	n/a
HEPBS	7.6-9.0	n/a	8.30	n/a	H6903	n/a
TAPS	7.7-9.1	8.49	8.40	8.18	T5130	T5316
AMPD	7.8-9.7	n/a	8.80	n/a	A9754	n/a
TABS	8.2-9.6	n/a	8.90	n/a	n/a	n/a
AMPSO	8.3-9.7	n/a	9.00	9.10	A6659	n/a
CHES	8.6-10.0	9.55	9.49	9.36	C2885	n/a
CAPSO	8.9-10.3	n/a	9.60	9.43	C2278	n/a
AMP	9.0-10.5	n/a	9.70	n/a	n/a	n/a
CAPS	9.7-11.1	10.56	10.40	10.02	C2632	n/a
CABS	10.0-11.4	n/a	10.70	n/a	C5580	n/a

Tris或Trizma^®缓冲液配制表–pH值与温度对照

pH值-温度对照
5 °C	25 °C	37 °C
7.76	7.20	6.91
7.89	7.30	7.02
7.97	7.40	7.12
8.07	7.50	7.22
8.18	7.60	7.30
8.26	7.70	7.40
8.37	7.80	7.52
8.48	7.90	7.62
8.58	8.00	7.71
8.68	8.10	7.80
8.78	8.20	7.91
8.88	8.30	8.01
8.98	8.40	8.10
9.09	8.50	8.22
9.18	8.60	8.31
9.28	8.70	8.42
9.36	8.80	8.51
9.47	8.90	8.62
9.56	9.00	8.70

g/L，0.05 M溶液
Trizma®盐酸	Trizma®碱
7.02	0.67
6.85	0.80
6.61	0.97
6.35	1.18
6.06	1.39
5.72	1.66
5.32	1.97
4.88	2.30
4.44	2.65
4.02	2.97
3.54	3.34
3.07	3.70
2.64	4.03
2.21	4.36
1.83	4.65
1.50	4.90
1.23	5.13
0.96	5.32
0.76	5.47

磷酸缓冲液配制表（0.2 M溶液）

无水磷酸 二氢钾(g/L)	七水磷酸氢二钠(g/L)	23 °C pH
22.4	3.49	5.7
22.08	4.29	5.8
21.60	5.37	5.9
21.05	6.60	6.0
20.40	8.05	6.1
19.56	9.93	6.2
18.60	12.07	6.3
17.64	14.22	6.4
16.44	16.90	6.5
15.00	20.12	6.6
13.56	23.34	6.7
12.24	26.29	6.8

无水磷酸 二氢钾(g/L)	七水磷酸 氢二钠(g/L)	23 °C pH
10.80	29.51	6.9
9.36	32.73	7.0
7.92	35.95	7.1
6.72	38.63	7.2
5.52	41.31	7.3
4.56	43.46	7.4
3.84	45.07	7.5
3.12	46.68	7.6
2.52	48.55	7.7
2.04	49.09	7.8
1.68	49.89	7.9
1.27	50.81	8.0

柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配制（pH 2.6-7.6）¹

单水柠檬酸(C₆H₈O₇ • H₂O)分子量=210.14；0.1 M溶液含21.01 g/L。Na₂HPO₄分子量=141.98；0.2 M溶液含28.40 g/L；或Na₂HPO₄ • 2H₂O分子量=178.05； 0.2 M溶液含35.61 g/L。

x毫升0.1 M柠檬酸和y毫升0.2 M磷酸氢二钠混合

pH	x毫升0.1 M柠檬酸	y毫升0.2 M磷酸氢二钠
2.6	89.10	10.90
2.8	84.15	15.85
3.0	79.45	20.55
3.2	75.30	24.70
3.4	71.50	28.50
3.6	67.80	32.20
3.8	64.50	35.50
4.0	61.45	38.55
4.2	58.60	41.40
4.4	55.90	44.10
4.6	53.25	46.75
4.8	50.70	49.30
5.0	48.50	51.50
5.2	46.40	53.60
5.4	44.25	55.75
5.6	42.00	58.00
5.8	39.55	60.45
6.0	36.85	63.15
6.2	33.90	66.10
6.4	30.75	69.25
6.6	27.25	72.75
6.8	22.75	77.25
7.0	17.65	82.35
7.2	13.05	86.95
7.4	9.15	90.85
7.6	6.35	93.65

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制（pH 3.0-6.2）¹

单水柠檬酸(C₆H₈O₇ • H₂O)分子量=210.14；0.1 M溶液含21.01 g/L。柠檬酸三钠(C₆H₅O₇Na₃ • 2H₂O)分子量=294.12；0.1 M溶液含29.41 g/L。

x毫升0.1 M柠檬酸和y毫升0.1 M柠檬酸三钠混合

pH	x毫升0.1 M柠檬酸	y毫升0.1 M柠檬酸三钠
3.0	82.0	18.0
3.2	77.5	22.5
3.4	73.0	27.0
3.6	68.5	31.5
3.8	63.5	36.5
4.0	59.0	41.0
4.2	54.0	46.0
4.4	49.5	50.5
4.6	44.5	55.5
4.8	40.0	60.0
5.0	35.0	65.0
5.2	30.5	69.5
5.4	25.5	74.5
5.6	21.0	79.0
5.8	16.0	84.0
6.0	11.5	88.5
6.2	8.0	92.0

乙酸钠-乙酸缓冲液配制（pH 3.7-5.6）¹

三水乙酸钠(CH₃COONa • 3H₂O)分子量=136.09；0.2 M溶液含27.22 g/L。

x毫升0.2 M乙酸钠和y毫升0.2 M乙酸混合

pH, 18 °C	x毫升0.2 M乙酸钠	y毫升0.2 M乙酸
3.7	10.0	90.0
3.8	12.0	88.0
4.0	18.0	82.0
4.2	26.5	73.5
4.4	37.0	63.0
4.6	49.0	51.0
4.8	59.0	41.0
5.0	70.0	30.0
5.2	79.0	21.0
5.4	86.0	14.0
5.6	91.0	9.0

磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液配制（25℃，pH 5.8-8.0）¹

Na₂HPO₄ • 2H₂O分子量=178.05；0.2 M溶液含35.61 g/L。Na₂HPO₄ • 12H₂O分子量=358.22；0.2 M溶液含71.64 g/L。NaH₂PO₄ • H₂O分子量=138.01；0.2 M溶液含27.6 g/L。NaH₂PO₄ • 2H₂O分子量=156.03；0.2 M溶液含31.21 g/L。

x毫升0.2 M Na₂HPO₄，y毫升0.2 M NaH₂PO₄；H₂O稀释至100 mL

pH, 25 °C	x毫升0.2 M-Na2HPO4	y毫升0.2 M-NaH2PO4
5.8	4.0	46.0
6.0	6.15	43.85
6.2	9.25	40.75
6.4	13.25	36.75
6.6	18.75	31.25
6.8	24.5	25.5
7.0	30.5	19.5
7.2	36.0	14.0
7.4	40.5	9.5
7.6	43.5	6.5
7.8	45.75	4.25
8.0	47.35	2.65

咪唑-盐酸缓冲液配制（25℃，pH 6.2-7.8）¹

咪唑(C₃H₄N₂)分子量68.08

25 mL 0.2 M咪唑(13.62 g/L)，x毫升0.2 M-HCl，H₂O稀释至100

pH, 25 °C	x毫升0.2 M-HCl
6.2	21.45
6.4	19.9
6.6	17.75
6.8	15.2
7.0	12.15
7.2	9.3
7.4	6.8
7.6	4.65
7.8	3.0

碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液配制（pH 9.2-10.8）¹

Na₂CO₃ • 10H₂O分子量=286.2；0.1 M含28.62 g/L。NaHCO₃分子量=84.0；0.1 M含8.40 g/L。

x毫升0.1 M-Na₂CO₃和y毫升0.1 M-Na₂HCO₃混合

20 °C	37 °C
x毫升0.1 M-Na2CO3	y毫升0.1 M-Na2HCO3
9.2	8.8	10	90
9.4	9.1	20	80
9.5	9.4	30	70
9.8	9.5	40	60
9.9	9.7	50	50
10.1	9.9	60	40
10.3	10.1	70	30
10.5	10.3	80	20
10.8	10.6	90	10

缓冲液配制算式

质量浓度(w/v)

组分所需质量浓度×最终缓冲液体积(mL)=组分质量(g)

摩尔浓度

组分所需摩尔浓度×分子量×溶液最终体积(L)=组分质量(g)

缓冲液PH值计算公式(Henderson-Hasselbach)

参考文献

1. Dawson R, Elliot D, Elliot W, Jones KM. 1986. Data for Biochemical Research. 3rd ed.. Oxford Science Publ..