Sắc ký lớp mỏng hiệu suất cao: Phương pháp phân tích vân tay nhanh chóng và hiệu quả cho cây thuốc
Tiên Do, Melanie Broszat, Matthias Nold
Ginsenosides là triterpene saponin. Hầu hết các ginsenoside bao gồm một bộ xương dammarane (17 carbon trong cấu trúc bốn vòng) với các gốc đường khác nhau (ví dụ glucose, rhamnoza, xylose và arabinose) gắn vào các vị trí C- 3 và C-20.
Hơn 30 ginsenoside đã được xác định và phân loại thành hai loại:
• 20(S)- protopanaxadiol (PPD) (Rb1, Rb2, Rb3, RC, RD, Rg3, Rh2, Rs1)
• 20(S)-protopanaxatriol (PPT) (RE, RF, Rg1, Rg2, Rh1). Sự khác biệt giữa PPT
và PPDs là sự hiện diện của một nhóm carboxyl ở vị trí C-6 trong PPD.
Hình 1.
Hơn nữa, một số ginsenoside hiếm gặp, chẳng hạn như ocotillol saponin F11 (24-R-pseudoginsenoside) và pentacyclic oleanane saponin Ro (3,28-o-bisdesmoside) cũng đã được xác định. Nhân sâm châu Á (Panax ginseng) thường được gọi là nhân sâm thực sự.
Trong bài viết này, các phương pháp HPTLC phù hợp để phân tích các nhân sâm được trình bày, sử dụng thiết bị CAMAAG, tấm MilliporeSigma TLC, tiêu chuẩn phân tích và trích xuất tài liệu tham khảo. Các vật liệu tham khảo chiết xuất được sản xuất bởi HWI Analytik và phân phối độc quyền bởi MilliporeSigma.
Phát hiện ginsenoside trong dấu vân tay HPTLC của các loài Panax khác nhau (rễ và chiết xuất rễ) thu được bằng cách tuân theo các phương pháp HPTLC của Ph. Eur. Chuyên khảo,1 USP DSC 2015 chuyên khảo 2and Phương pháp của Hiệp hội HPTLC (Hiệp hội quốc tế vì sự tiến bộ của HPTLC) 3 bằng cách so sánh các giá trị RF và màu sắc của các chất tham chiếu và các khu vực phù hợp trong chiết xuất gốc. Tùy thuộc vào quy định sau đó, một trong ba phương pháp nhận dạng có thể được sử dụng.
Thiết bị CAMAG khuyến nghị:
Lấy mẫu TLC tự động (ATS 4), Phòng phát triển tự động (ADC 2), Bộ ảo hóa TLC 2, Thiết bị Immersion Chromatogram 3, Bộ gia nhiệt TLC 3 và visionCATS
Chất phản ứng phái sinh:
Anisaldehyde 1or Thuốc thử axit sulfuric2,3
Mẫu:
0,015 g/mL chiết xuất (chiết xuất HWI) trong 70% methanol1 Lưu ý: Sai lệch so với Phương pháp 2 và 3 để chuẩn bị mẫu
Tiêu chuẩn:
Các dung dịch tiêu chuẩn của ginsenoside được điều chế trong nồng độ 0,5 mg/mL trong methanol.
Lưu ý: Sai lệch so với Phương pháp 3 đối với thể tích ứng dụng
Sắc ký sau USP <203> 4:
Pha tĩnh: HPTLC Si 60 F254 20 x 10 cm (MilliporeSigma)
Ứng dụng mẫu: 4 µL Mỗi dung dịch kiểm tra và 2 µL của các tiêu chuẩn được áp dụng là dải 8 mm, 8 mm từ cạnh dưới, 20 mm từ cạnh trái1, 3
Lưu ý: Sai lệch so với Phương pháp 3 để chuẩn bị mẫu và khối lượng ứng dụng của các giải pháp tham khảo và kiểm tra
4 µL Mỗi dung dịch kiểm tra và 4 µL tiêu chuẩn được áp dụng như dải 8 mm, 8 mm từ cạnh dưới, 20 mm từ cạnh trái2
Lưu ý: Sai lệch so với Phương pháp 2 để chuẩn bị mẫu
Phát triển dung môi: Etyl axetat – nước – butanol 25:50:100 (v/v/v) - lớp trên1
Dichloromethane – ethanol – nước 70:45:6,5 (v/v/v)2
Chloroform – etyl axetat – metanol – nước 15:40:22:9 (v/v/v/v) 3
Phát triển: Trong ADC 2 với buồng không bão hòa và sau khi điều hòa ở độ ẩm tương đối 33% trong 10 phút sử dụng dung dịch bão hòa magiê clorua1
Quá trình phát triển được thực hiện với ADC 2, bão hòa trong 20 phút với dung môi đang phát triển (giấy lọc). Trước khi phát triển, tấm được điều tiết trong 10 phút đến độ ẩm tương đối là 33% (với dung dịch bão hòa là MgCl2).2, 3
Khoảng cách phát triển: 70 mm (từ cạnh dưới)1, 2; 80 mm (từ cạnh dưới)3
Sấy tấm: 5 phút trong luồng khí lạnh
Dẫn xuất: Tấm được ngâm (tốc độ ngâm: 3 cm/s, thời gian ngâm: 0 s) vào thuốc thử anisaldehyd (hỗn hợp 0,5 mL o fp-anisaldehyde, 10 mL axit axetic băng, 85 mL methanol và 5 mL axit sulfuric) với thiết bị Chromatogram Immersion 3 và được đun nóng trong 5 phút ở 105°C.1
Tấm được ngâm (tốc độ ngâm: 3 cm/s, thời gian ngâm: 0 giây) thành chất thử axit sulfuric (10% trong metanol) với thiết bị Chromatogram Immersion 3 và đun nóng trong 5 phút ở 100 °C.2, 3
Đánh giá: Tài liệu theo phương pháp 3 là với 100 °C ánh sáng trắng1, 2, 3and UV 366 nm2, 3after phái sinh với TLC Visualizer 2
Kết quả và Thảo luận:
HPTLC sắc ký các tiêu chuẩn ginsenoside và chiết xuất Panax ginsen groot
Sắc ký HPTLC sau khi dẫn xuất. Dấu vết
1-17: Ginsenosides, track 18: Protopanaxadiol, track 19: Panax ginsen groot Extract (article no.: 05115001 batch: HWI01294)
Phương pháp 1:According to the Ph. Eur.
Sắc ký HPTLC dưới ánh sáng trắng sau khi dẫn xuất
Phương pháp 2:Theo phương pháp nhân sâm Tienshi từ
Sắc ký HPTLC dưới UV 366 nm và dưới ánh sáng trắng sau khi dẫn xuất
Phương pháp 3:Theo Hiệp hội HPTLC
Sắc ký HPTLC dưới UV 366 nm và dưới ánh sáng trắng sau khi dẫn xuất.
Sắc ký HPTLC của thực vật có chứa nhân sâm (các loài Panax khác nhau)
P. ginseng, P. quinquefolium, P. notoginseng, P. japonicus, P. vietnamensi rễ và chiết xuất rễ được thu thập và phân tích. P. ginsen groot Extract (bài viết số: 0511-50-01 lô: HWI01294) được sử dụng làm tài liệu tham khảo thực vật để xác định nhân sâm châu Á (nên có mặt RF bên lề và F11 vắng mặt).
Phương pháp 1:According to the Ph. Eur.
Sắc ký HPTLC dưới ánh sáng trắng sau khi dẫn xuất.
Track 1: Ginsenoside RF (mũi tên màu xanh lá cây); 2: Ginsenoside F11 (mũi tên đỏ); 3: P. ginsen groot chiết xuất (bài viết số: 0511-50-01 lô: HWI01294, ginsenoside RF được tô sáng bằng mũi tên màu xanh lá cây); 4: P. ginseng root (ginsenoside RF được tô sáng bằng mũi tên màu xanh lá cây); 5: P. quinquefoliu chiết xuất gốc
(American ginseng, ginsenoside F11 được đánh dấu bằng mũi tên đỏ); 6 : P quinquefoliu root (Gin American ginseng, ginoside F11 được đánh dấu bằng mũi tên đỏ); 7: P. notoginsen groot trích xuất;
8: P. notoginsen groot; 9 : P. japonica sroot; 10: P. vietnamensi sroot ; 11: Wild Vietnamese ginseng root.
Phương pháp 2:Theo phương pháp nhân sâm Tienshi từ
Sắc ký HPTLC dưới UV 366 nm và dưới ánh sáng trắng sau khi dẫn xuất
Phương pháp 3:Theo Hiệp hội HPTLC
Sắc ký HPTLC dưới UV 366 nm và dưới ánh sáng trắng sau khi dẫn xuất.
Tham số Phương pháp 2 & 3:
Sắc ký HPTLC dưới ánh sáng trắng và UV 366 nm sau khi phái sinh với ginsenoside RF (mũi tên màu xanh lá cây) và ginsenoside F11 (mũi tên màu đỏ).
Track 1: P. ginsen groot Extract (bài viết số: 05115001 batch: HWI01294, Ginsenoside RF được tô sáng bằng mũi tên màu xanh lá cây); 2 : P. ginsen groot (ginsenoside RF được tô sáng bằng mũi tên màu xanh lá cây); 3: P. quinquefoliu chiết xuất gốc rễ ( American ginseng, ginsenoside F11 được tô sáng bằng mũi tên màu đỏ); 4 : P quinquefoliu mroot (ginseng Mỹ, ginoside F11 được đánh dấu bằng mũi tên đỏ); 5: P. notoginsen groot trích xuất; 6: P. notoginsen groot; 7 : P. japonica sroot; 8: P. vietnamensi sroot ;
9: Wild Vietnamese ginseng root.
Tất cả các phương pháp được hiển thị đều thích hợp để phát hiện ginsenoside trong các loài Panax khác nhau. Ginsenoside RF là duy nhất cho nhân sâm châu Á trong khi F11 chỉ được tìm thấy trong nhân sâm của Mỹ. Do đó, tỷ lệ RF/F11 được sử dụng như một dấu hiệu hóa học thực vật để phân biệt nhân sâm Mỹ với nhân sâm châu Á. Trong tài liệu tham khảo thực vật được sử dụng (Panax ginsen groot chiết xuất, bài viết số: 0511-50-01) Sự hiện diện của RF và vắng mặt của F11 có thể được xác nhận với tất cả các phương pháp và do đó nó phù hợp để xác định nhân sâm châu Á.
Phương pháp 1 và 2 có lợi thế ở chỗ chúng phù hợp với chuyên khảo chính thức trong dược lực học (Ph. Eur. người bán lại USP). Phương pháp 3 là một phương pháp thay thế được cung cấp bởi Hiệp hội HPTLC. Phương pháp này được cải thiện cho việc tách RF và F11 để phân biệt tốt hơn nhân sâm của Mỹ và châu Á. Việc dẫn xuất với thuốc thử axit sulfuric (phương pháp 2 và 3) dẫn đến các vùng màu khác nhau dưới UV 366 nm, hữu ích để xác định.
Vật liệu
Tài liệu tham khảo
Để tiếp tục tìm hiểu, vui lòng đăng nhập hoặc tạo tài khoản.
Không có tài khoản?