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DN25
Deoxyribonuclease I aus Rinderpankreas
lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein
Deoxyribonuclease I from bovine pancreas
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Synonym(e):
Desoxyribonuklease, DNase I, Deoxyribonucleat-5′-oligonucleotido-hydrolase
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100 mg | Warenkorb auf Verfügbarkeit prüfen | CHF 201.00 |
1 g | Warenkorb auf Verfügbarkeit prüfen | CHF 1'070.00 |
5 g | Warenkorb auf Verfügbarkeit prüfen | CHF 2'190.00 |
Über diesen Artikel
CAS-Nummer:
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.54
EC Number:
232-667-0
MDL number:
Specific activity:
≥400 Kunitz units/mg protein
Biological source:
bovine pancreas
Technischer Dienst
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Unterstützung erhaltenbiological source
bovine pancreas
Quality Segment
form
lyophilized powder
specific activity
≥400 Kunitz units/mg protein
mol wt
~31 kDa
composition
Protein, ≥85%
technique(s)
DNA extraction: suitable
solubility
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
suitability
suitable for molecular biology
application(s)
diagnostic assay manufacturing
foreign activity
RNase ≤0.02%
shipped in
wet ice
storage temp.
−20°C
General description
DNase I oder Desoxyribonuklease I, ist eine Endonuklease, die aus Rinderpankreas isoliert wird.
- Unsere DNase I schließt Doppelstrang- und Einzelstrang-DNA zu Oligo- und Mononukleotiden auf.
- Rinderpankreas-DNase existiert als vier Isozyme mit folgenden isoelektrischen Punkten für A, B, C und D: 5,22; 4,96; 5,06 und 4,78.3. Die vorherrschende Form ist A, mit kleineren Anteilen von B und C und nur einer geringen Menge von D.
- Die Struktur von DNase I ähnelt der Struktur von Exonuklease III. Sie umfasst zwei zentrale β-Faltblätter. Jedes β-Faltblatt besteht aus sechs β-Strängen. Dieser Komplex aus β-Faltblättern ist von umfangreichen Schleifen und α-Helixregionen umgeben. Dieses Enzym weist eine strukturelle Ähnlichkeit zu Endonuklease III auf.[1]
Application
- Verringert die Viskosität und bietet bessere Ausbeuten, indem DNA bei der Primärzellisolation entfernt wird:
- Integrieren von markierten Basen in DNA: DNA-Nick
- Radioaktive Markierung
- Bioprozesstechnik-Anwendungen: DNA-Entfernung
- Entfernen von genomischer DNA aus RNA-Aufbereitungen vor RT-PCR
- In-vitro-Transkription
- Nick-Translation
- DNase-Footprinting
- Aktinregulierung der Aktinpolymerisation in Zellen und Zellapoptose
- UV-Vernetzung von Proteinen mit Nukleinsäuren
- DNase spielt eine Rolle bei der Regulierung der Aktinpolymerisation in Zellen und ist am Apoptoseprozess beteiligt [1]
DNA-Entfernung in Proteinproben
Biochem/physiol Actions
DNase I ist eine Endonuklease, die auf Phosphodiesterbindungen neben Pyrimidinen wirkt, um Polynukleotide mit terminalen 5′-Phosphaten zu erzeugen. Bei Anwesenheit von Mg2+ spaltet DNase I jeden DNA-Strang unabhängig und an beliebigen Stellen. Beide DNA-Stränge werden in Anwesenheit von Mn2+ ungefähr an den gleichen Stellen gespaltet. Zweiwertige Kationen wie Mn2+, Ca2+, Co2+ und Zn2+ aktivieren das Enzym. Eine Konzentration von 5 mM Ca2+ stabilisiert das Enzym gegen proteolytische Verdauung. Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7 und 8. DNase I aus Rinderpankreas besteht aus vier chromatografisch unterscheidbaren Komponenten, A, B, C und D, mit einem Molverhältnis von 4:1:1. Es finden sich nur geringfügige Mengen an D.[1] 2-Mercaptoethanol, Chelatoren, Natriumdodecylsulfat (SDS)[2] und Aktin[3] hemmen bekanntlich die Enzymaktivität.
Features and Benefits
Unsere Desoxyribonuklease DNase I ist ein im Wesentlichen RNase-freies Produkt, das die Produktanwendung unterstützt.
Physical form
Rohe Zubereitung, enthält Calciumchlorid
Preparation Note
10 mg/ml Lösung von DNase I in 0,15 M NaCl können <10 % ihrer Aktivität verlieren, wenn sie eine Woche lang in Aliquoten bei −20 °C aufbewahrt wird. Die gleichen Lösungen können bei Lagerung in Aliquoten bei 2–8 °C etwa 20 % ihrer Aktivität verlieren. Die Lösung bleibt bei 60 °C und einem pH-Wert zwischen 5 und 7 bis zu fünf Stunden aktiv und verliert ihre Aktivität in <10 Minuten bei 68 °C. Sie verliert ihre Aktivität mit einer Rate von 6 %/Stunde in Acetatpuffer (pH-Wert 5,0) und Tris-Puffer (pH-Wert 7,2) bei einer Konzentration von 1 mg/ml.
Analysis Note
Proteinbestimmung durch Biuret.
Other Notes
Eine Kunitz-Einheit erzeugt unter Verwendung von DNA Typ I oder III als Substrat eine Veränderung von A260 von 0,001 je min und ml bei einem pH-Wert von 5,0 und bei 25 °C.
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| specific activity ≥400 Kunitz units/mg protein | specific activity ≥2,000 units/mg protein | specific activity ≥2,000 Kunitz units/mg protein | specific activity ≥2,000 units/mg protein |
| biological source bovine pancreas | biological source bovine pancreas | biological source bovine pancreas | biological source bovine pancreas |
| technique(s) DNA extraction: suitable | technique(s) DNA extraction: suitable | technique(s) DNA purification: suitable | technique(s) DNA purification: suitable |
| application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) diagnostic assay manufacturing |
| form lyophilized powder | form lyophilized powder | form lyophilized powder | form lyophilized powder |
| suitability suitable for molecular biology | suitability suitable for molecular biology | suitability suitable for molecular biology | suitability suitable for molecular biology |
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signalword
Danger
hcodes
pcodes
Hazard Classifications
Resp. Sens. 1
Lagerklasse
11 - Combustible Solids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
ppe
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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What is the salt tolerance of this DNase I?
1 answer-
Helpful?
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I would like to know if this product can be used to eliminate DNA from cells in tissue culture (12 wells chamber slide) before immunofluorescent staining? if it can be used - how?
1 answer-
This product can be used to eliminate DNA from cells in tissue culture. Concentration and incubation time should be optimized based on the specific application.
Helpful?
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HOW CAN I PRESERVE DN25 DILUTED and filtered in culture medium? 4C or -20 C?. It will lose activity?
1 answer-
This product is soluble in 0.15 M NaCl at 5 mg/mL. Solutions prepared at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose up to 10% activity when stored for 1 week in aliquots at –20 °C. The same solutions stored in aliquots at 2-8 °C can lose up to 20% activity. Please see the link below to review the product datasheet for additional information:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/233/818/dn25pis-ms.pdfHelpful?
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What is the recommended method for long-term storage of the 1 gram bottle of DN25 in solution?
1 answer-
The user bulletin provides guidance on the storage of DNase I once reconstituted. When stored in aliquots at -20°C, solutions of DNase I at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose 10% of activity over a week, while storing the same solutions at 2–8°C can result in a 20% activity loss. Alternatively, maintaining solutions at a minimum concentration of 1 mg protein/mL with 5 mM calcium chloride at -20°C can retain 90% activity for at least a year. Solutions with 0.1 mg protein/mL are less stable and may need gelatin as a stabilizer.
For applications not affected by glycerol, two storage buffer options are available as they do not freeze at -20°C:
• 20 mM sodium acetate (pH 6.5) with 5 mM CaCl2, 0.1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), and 50% (v/v) glycerol, containing DNase I at 5 mg/mL.
• 10 mM Tris-HCl (pH 7.5) with 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 50% (v/v) glycerol, with DNase I at 2 mg/mL.Helpful?
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Hi I use the DNase during isolation of cells from lung tissue. Do I need to filter the DNase solution before usage?
1 answer-
This is not a sterile product. If sterility is required due to the specific application, solutions may be filter sterilized before use. Please see the link below to review the product datasheet:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/233/818/dn25pis-ms.pdfHelpful?
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I use the DNase when I isolate lung cells from lung. Do I need to filter them before I use? I will culture the isolated lung cells.
1 answer-
Yes, please filter the DNase solution before use in cell culture, preferably with a 0.22 um filter. The powder is not sterilized as provided.
Helpful?
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