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DN25
Désoxyribonucléase I from bovine pancreas
lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein
Deoxyribonuclease I from bovine pancreas
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Synonyme(s) :
Désoxyribonucléase, DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
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| Conditionnement | Référence | Disponibilité | Prix |
|---|---|---|---|
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A propos de cet article
Numéro CAS:
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.54
EC Number:
232-667-0
MDL number:
Specific activity:
≥400 Kunitz units/mg protein
Biological source:
bovine pancreas
Service technique
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Laissez-nous vous aiderbiological source
bovine pancreas
Quality Level
form
lyophilized powder
specific activity
≥400 Kunitz units/mg protein
mol wt
~31 kDa
composition
Protein, ≥85%
technique(s)
DNA extraction: suitable
solubility
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
suitability
suitable for molecular biology
application(s)
diagnostic assay manufacturing
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|---|---|---|---|
| biological source bovine pancreas | biological source bovine pancreas | biological source bovine pancreas | biological source bovine pancreas |
| specific activity ≥400 Kunitz units/mg protein | specific activity ≥2,000 units/mg protein | specific activity ≥2,000 units/mg protein | specific activity 1700—2300 U/vial |
| technique(s) DNA extraction: suitable | technique(s) DNA extraction: suitable | technique(s) DNA purification: suitable | technique(s) DNA extraction: suitable |
| application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) diagnostic assay manufacturing |
| form lyophilized powder | form lyophilized powder | form lyophilized powder | form powder |
| suitability suitable for molecular biology | suitability suitable for molecular biology | suitability suitable for molecular biology | suitability suitable for molecular biology |
General description
La désoxyribonucléase I ou DNase I est une endonucléase isolée dans le pancréas des bovins.
- Notre DNase I digère l'ADN double brin et l'ADN simple brin en oligonucléotides et en mononucléotides.
- La DNase pancréatique bovine se présente sous quatre formes différentes : les isoenzymes A, B, C et D. Leurs points isoélectriques sont les suivants : 5,22, 4,96, 5,06 et 4,78.3. L'isoenzyme A est la forme prédominante, les isoenzymes B et C étant présentes en plus faibles quantités et la forme D en quantités minimes.
- La structure de la DNase I ressemble à celle de l'exonucléase III. Elle comprend deux feuillets β centraux. Chaque feuillet β est composé de six brins β. Ce complexe de feuillets β est entouré de régions de boucles et de régions α-hélicoïdales importantes. Cette enzyme présente des similitudes structurales avec l'exonucléase III.[1]
Application
- Diminue la viscosité, pour de meilleurs rendements, en éliminant l'ADN lors de l'isolement de cellules primaires
- Incorporation de bases marquées dans l'ADN : coupure simple brin
- Marquage radioactif
- Bioprocédés : élimination de l'ADN
- Élimination de l'ADN génomique des préparations d'ARN avant RT-PCR
- Transcription in vitro
- Translation de coupure
- Footprinting à la DNase
- Régulation de la polymérisation de l'actine dans les cellules et régulation de l'actine dans l'apoptose cellulaire
- Fixation des protéines sur les acides nucléiques par réticulation UV
- La DNase joue un rôle dans la régulation de la polymérisation de l'actine dans les cellules et est impliquée dans le processus d'apoptose[1]
Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.
Biochem/physiol Actions
La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester adjacentes à des pyrimidines et qui produit des polynucléotides ayant des groupements 5′-phosphate terminaux. En présence de Mg2+, la DNase I clive indépendamment chaque brin d'ADN et les sites de clivage sont aléatoires. Les deux brins d'ADN sont clivés approximativement au niveau du même site en présence de Mn2+. Les cations divalents tels que Mn2+, Ca2+, Co2+ et Zn2+ sont des activateurs de cette enzyme. Une concentration en Ca2+ de 5 mM la stabilise vis-à-vis de la digestion protéolytique. Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. La DNase I de pancréas de bovin est constituée de quatre éléments, A, B, C et D, qui peuvent être distingués par chromatographie. Le rapport molaire des éléments A, B et C est de respectivement 4:1:1. L'élément D est présent en très faible quantité.[1] Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS)[2] et l'actine[3] sont connus pour inhiber l'activité de cette enzyme.
Features and Benefits
Notre désoxyribonucléase DNAse I est essentiellement dépourvue de RNAse, ce qui facilite la mise en œuvre du produit.
Physical form
Préparation brute, contient du chlorure de calcium
Preparation Note
Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu'elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d'activité peut être d'environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active pendant 5 heures maximum à 60 °C entre pH 5 et pH 7 et devient inactive après moins de 10 minutes à 68 °C. Sa perte d'activité est de 6 % par heure dans un tampon acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.
Analysis Note
Protéine déterminée par la réaction du biuret.
Other Notes
Une unité Kunitz provoque une variation de A260 de 0,001 par minute et par ml à pH 5,0 et 25 °C, en utilisant comme substrat de l'ADN de type I ou III.
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Réf. du produit
Description
Tarif
signalword
Danger
hcodes
pcodes
Hazard Classifications
Resp. Sens. 1
Classe de stockage
11 - Combustible Solids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
ppe
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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Purification of rat spermatogenic cells and preliminary biochemical analysis of these cells.
M L Meistrich et al.
Biology of reproduction, 25(5), 1065-1077 (1981-12-01)
Enzymes of Molecular Biology
Weir, A.F.
Methods in Molecular Biology, 16(2), 2-16 null
Murali Muniraju et al.
Journal of virology, 93(16) (2019-05-31)
Kaposi sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) is an emerging pathogen and is the causative infectious agent of Kaposi sarcoma and two malignancies of B cell origin. To date, there is no licensed KSHV vaccine. Development of an effective vaccine against KSHV continues
Comparison of the multiple forms of bovine pancreatic deoxyribonuclease.
J Salnikow et al.
The Journal of biological chemistry, 245(21), 5685-5690 (1970-11-10)
G A Scarborough
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 73(5), 1485-1488 (1976-05-01)
Biochemicalical evidence is presented which demonstrates that the Neurospora crassa plasma membrane ATPase (ATP phosphohydrolase, EC 3.6.1.3) is an electrogenic pump. The electrical potential across the Neurospora plasma membrane, as monitored by [14C]SCN- uptake by isolated Neurospora plasma membrane vesicles
Protocoles
To standardize a procedure for the enzymatic assay of Deoxyribonuclease I.
Contenu apparenté
Find protein research tools to prepare, isolate, and analyze proteins. Organized by how to extract, protect, purify, enrich, modify, and quantify proteins.
Numéro d'article de commerce international
| Référence | GTIN |
|---|---|
| FTP98142 | 04054839230615 |
| FTP98898 | 04054839199660 |
| DN25-5G | 04061833591673 |
| DN25-10MG | 04061835544349 |
| DN25-100MG | 04061835556687 |
| DN25-1G | 04061835556694 |
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What is the salt tolerance of this DNase I?
1 answer-
Helpful?
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I would like to know if this product can be used to eliminate DNA from cells in tissue culture (12 wells chamber slide) before immunofluorescent staining? if it can be used - how?
1 answer-
This product can be used to eliminate DNA from cells in tissue culture. Concentration and incubation time should be optimized based on the specific application.
Helpful?
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HOW CAN I PRESERVE DN25 DILUTED and filtered in culture medium? 4C or -20 C?. It will lose activity?
1 answer-
This product is soluble in 0.15 M NaCl at 5 mg/mL. Solutions prepared at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose up to 10% activity when stored for 1 week in aliquots at –20 °C. The same solutions stored in aliquots at 2-8 °C can lose up to 20% activity. Please see the link below to review the product datasheet for additional information:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/233/818/dn25pis-ms.pdfHelpful?
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What is the recommended method for long-term storage of the 1 gram bottle of DN25 in solution?
1 answer-
The user bulletin provides guidance on the storage of DNase I once reconstituted. When stored in aliquots at -20°C, solutions of DNase I at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose 10% of activity over a week, while storing the same solutions at 2–8°C can result in a 20% activity loss. Alternatively, maintaining solutions at a minimum concentration of 1 mg protein/mL with 5 mM calcium chloride at -20°C can retain 90% activity for at least a year. Solutions with 0.1 mg protein/mL are less stable and may need gelatin as a stabilizer.
For applications not affected by glycerol, two storage buffer options are available as they do not freeze at -20°C:
• 20 mM sodium acetate (pH 6.5) with 5 mM CaCl2, 0.1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), and 50% (v/v) glycerol, containing DNase I at 5 mg/mL.
• 10 mM Tris-HCl (pH 7.5) with 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 50% (v/v) glycerol, with DNase I at 2 mg/mL.Helpful?
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Hi I use the DNase during isolation of cells from lung tissue. Do I need to filter the DNase solution before usage?
1 answer-
This is not a sterile product. If sterility is required due to the specific application, solutions may be filter sterilized before use. Please see the link below to review the product datasheet:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/233/818/dn25pis-ms.pdfHelpful?
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I use the DNase when I isolate lung cells from lung. Do I need to filter them before I use? I will culture the isolated lung cells.
1 answer-
Yes, please filter the DNase solution before use in cell culture, preferably with a 0.22 um filter. The powder is not sterilized as provided.
Helpful?
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