COLLA-RO

Collagenase A

from Clostridium histolyticum

• UNSPSC Code: 12352204
• EG-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Specific activity: >0.15 U/mg lyophilizate (Collagenase activity)
• Biological source: Clostridium histolyticum
• Concentration: 1 mg/mL (0.1%, w/v)

Eigenschaften

• biological source: Clostridium histolyticum
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• specific activity: >0.15 U/mg lyophilizate (Collagenase activity)
• packaging: pkg of 100 mg (10103578001), pkg of 2.5 g (11088793001), pkg of 500 mg (10103586001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: 1 mg/mL (0.1%, w/v)
• color: brown
• optimum pH: 6.0-8.0
• solubility: water: soluble
• suitability: suitable for PCR
• NCBI accession no.: WP_138210331
• UniProt accession no.: A0A4U9RG91
• application(s): cell analysis; life science and biopharma; sample preparation
• foreign activity: Clostripain 9.489 U/mg, Proteases 6.067 U/mg (Azocoll ), Trypsin 0.144 U/mg (with BAEE)
• storage temp.: 2-8°C
• Gene Information: Clostridium histolyticum ... COLA_1(1668506084)

Beschreibung

General description

Collagenase ist eine Protease, die das Dreifachhelix-Protein Collagen spaltet.[1] Clostridium histolyticum produziert sechs Collagenasetypen: α, β, γ, δ, ε und λ. Diese Collagenasen sind gegen Bindegewebe aktiv und zeigen eine stärkere Reaktivität gegenüber Gelatine als Collagen.[2] Collagenase aus Clostridium histolyticum weist eine sehr starke Aktivität auf, da es Collagen von beiden Enden bei Temperaturen von nur 4-10 °C verdaut.[3]

Application

Kollagenase aus C. histolyticum findet häufig Verwendung:

• Bei der Disaggregation zahlreicher Gewebetypen (z. B. Lunge, Herz, Muskel, Knochen, Fettgewebe, Leber, Niere, Knorpel, Brustdrüse, Plazenta, Blutgefäße, Gehirn, Tumoren, Nabelschnur)
• Bei der Herstellung von Einzelzellsuspensionen zur Etablierung primärer Zellkultursysteme.[4] Kollagenase A wird empfohlen, wenn Ausbeute, Viabilität und Funktionalität entscheidende Faktoren darstellen.[5][6]
• Zur Präparation von Zellen aus vielen Gewebetypen, darunter Hepatozyten, Adipozyten, Pankreasinselzellen, Epithelzellen, Muskelzellen, Endothelzellen usw. Es sollte jedoch bei jeder Enzymcharge empirisch ermittelt werden, ob sie für den Aufschluss eines bestimmten Gewebes geeignet ist.[7][8]

Biochem/physiol Actions

Collagenase baut natives Collagen ab. Clostripain, trypsinähnliche Enzyme und neutrale Proteasen bauen ebenfalls andere Proteine ab.
Enzymaktivität:
Collagenaseaktivität: >0,15 U/mg (nach Wünsch) (+25 °C, 4-Phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg als Substrat)
Kontaminierende Enzymaktivitäten: Trypsin, Clostripain und neutrale proteolytische Aktivität
Collagenase A weist ein ausgeglichenes Verhältnis von Enzymaktivitäten auf.

Preparation Note

Aktivator: Ca²⁺
Inhibitoren:
Collagenase-Inhibitoren: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-Mercaptoethanol
Collagenase wird durch Serum nicht gehemmt.
Clostripain-Inhibitoren: TLCK
Trypsin-Inhibitoren: Aprotinin, Trypsin-Inhibitor (Eiklar, Sojabohnen), Serum
Arbeitskonzentration: 0,5 bis 2,5 mg/ml
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): -15 bis -25 °C
Roche empfiehlt, nur die Lyophilisatmenge zu rekonstituieren, die für die sofortige Anwendung benötigt wird. Die rekonstituierte Lösung kann bei -15 bis -25 °C bis zu einer Woche aufbewahrt werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden, da die Aktivität nach der Rekonstituierung abnimmt.

Behälter dicht verschlossen an einem trockenen und gut belüfteten Ort aufbewahren.

Rekonstituierung in jeder ausgeglichenen Salzlösung (z.B. HBSS)

Other Notes

Definition der Einheit: Collagenase von Roche wird in Wünsch-Einheiten (1 μmol Produkt wird pro Minute bei +25 °C mit Wünsch-Substrat gebildet) getestet.
Die Collagenase-Aktivität wird häufig in Mandl-Einheiten angegeben (1 μmol Leucin wird in 5 Stunden bei +37 °C aus Collagen freigesetzt).
Leider gibt es keinen einheitlichen Umrechnungsfaktor zwischen den beiden Aktivitätseinheiten, weil die Mandl-Einheit zum Teil von der nicht definierbaren Variable der Konzentration kontaminierender Proteasen in der Collagenasezubereitung abhängt. Eine reinere Collagenasezubereitung ergäbe somit eine geringere spezifische Aktivität in Mandl-Einheiten als eine Rohzubereitung. Für Clostridium-Zubereitungen sind üblicherweise Umrechnungsfaktoren von ca. 1:1800 angegeben (z.B. enthielt eine bestimmte Charge Clostridium-Collagenase ca. 0,15 Wünsch-U/mg und 250 Mandl-U/mg).

Inhalt
Lyophilisat, nicht steril

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Disclaimer

Shipping conditions may vary

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
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