C7657

Collagenase aus Clostridium histolyticum

Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid

• Synonym(e): Clostridiopeptidase A
• CAS-Nummer: 9001-12-1
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-582-9
• MDL number: MFCD00130830
• EG-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥800 CDU/mg solid, 2-5 FALGPA units/mg solid
• Biological source: Clostridium histolyticum

Eigenschaften

• biological source: Clostridium histolyticum
• Quality Segment: 200
• form: powder
• specific activity: ≥800 CDU/mg solid, 2-5 FALGPA units/mg solid
• mol wt: 68-130 kDa
• solubility: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

Application

Dieses Produkt wird bei der Isolierung von duktalen Pankreasadenokarzinom (PDAC)-Zelllinien und der Gewebekultur von pankreatischen Fibroblasten eingesetzt.

Clostridiopeptidase A wurde in einer Studie eingesetzt, bei der eine quantitative Methode zur Beurteilung kleiner Kollagenmengen auf Basis der MALDI-TOF-Massenspektrometrie (MS) im Anschluss an den Kollagenaufschluss beschrieben wurde (MALDI-TOF = Kombination der matrix-assistierten Laser-Desorption/Ionisierung mit der Flugzeitanalyse).

Biochem/physiol Actions

Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.

Eine wirksame Freisetzung von Zellen aus dem Gewebe erfordert die Wirkung von Kollagenase-Enzymen und der neutralen Protease. Kollagenase wird durch vier Grammatom Calcium (Ca²⁺) pro Mol Enzym aktiviert. Es wird davon ausgegangen, dass das Kulturfiltrat mindestens 7 verschiedene Proteasen mit einer Molekülmasse von 68-130 kDa enthält. Der optimale pH-Wert beträgt 6,3-8,8. Das Enzym wird üblicherweise zum Aufschluss von Bindegewebekomponenten in Gewebeproben verwendet, um einzelne Zellen freizusetzen. Die Kollagenase-Behandlung kann dazu führen, dass einige Zellen absterben. Üblicherweise werden Konzentrationen von 0,1 bis 5 mg/ml für den Aufschluss verwendet. Die Dauer der Reaktion variiert von 15 Minuten bis zu mehreren Stunden und führt zu einer zufriedenstellenden Effizienz der Zelldissoziation, ohne zu viele Zellen absterben zu lassen. Krebs-Ringer-Puffer mit Calcium und BSA wird bevorzugt und Zn²⁺ wird für die Aktivität benötigt.

Preparation Note

Eine Stammlösung kann durch das Auflösen von 0,05 - 0,1 mg/ml Kollagenase bei 37 °C in 50-mM-TES-Puffer, der 0,36 mM Calciumchlorid (TESCA) mit einem pH-Wert von 7,4 enthält, hergestellt werden.

Analysis Note

Enthält außerdem Clostripain, unspezifische neutrale Protease und tryptische Aktivitäten.

Other Notes

Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves