CS1030

Chitinase-Assay-Kit, fluorimetrisch

sufficient for 200 multiwell tests

• Synonym(e): Chitinase-Nachweis-Kit
• NACRES: NA.84
• UNSPSC Code: 12161503

Eigenschaften

• usage: sufficient for 200 multiwell tests
• Quality Segment: 200
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C
• Gene Information: human ... CHIT1(1118)

Beschreibung

General description

Der Assay basiert auf der enzymatischen Hydrolyse der Chitinase-Substrate. Diese enzymatische Hydrolyse setzt 4-Methylumbelliferon (4MU) frei, das nach seiner Ionisierung in basischem pH auf einer Erregungswellenlänge von 360 nm und einer Emissionswellenlänge von 450 nm fluorometrisch gemessen werden kann. Die Verwendung von fluorometrischen Substraten ergibt ein sehr sensitives Nachweissystem.

Application

Das Kit wurde geprüft und als geeignet befunden für Trichoderma viride und Streptomyces griseus sowie die Säugetierzelllinien Hela, Jurkat, CHO, NIH-3T3, U-837, humane Makrophagen, Rattenlungen-, Nieren-, Leber- und Hirngewebe.

Das Chitinase-Assay-Kit enthält alle Reagenzien, die für eine effiziente und sensitive Detektion der Chitinaseaktivität in Pilz- und Bakterienkulturmedium, Makrophagenlysaten und aufgereinigten Enzympräparationen erforderlich sind. Des Weiteren enthält das Kit drei verschiedene Substrate für den Nachweis verschiedener Arten der chitinolytischen Aktivität:

• 4-Methylumbelliferyl N,N′-diacetyl-β-D-chitobiosid-Substrat für den Nachweis der Exochitinase-Aktivität (Chitobiosidase-Aktivität)
• 4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-glucosaminid-Substrat für den Nachweis der Exochitinase-Aktivität (β-N-acetylglucosaminidase-Aktivität)
• 4-Methylumbelliferyl β-D-N,N′,N′′-triacetylchitotriose-Substrat für den Nachweis der Endochitinase-Aktivität

Biochem/physiol Actions

Chitinase katalysiert die hydrolytische Spaltung der β-1→4-Glycosidbindung in Biopolymeren von N-Acetylglucosamin, hauptsächlich in Chitin. Chitinasen sind weit verbreitet in lebenden Organismen und in Pilzen, Bakterien, Parasiten, Pflanzen und Tieren zu finden. Sie sind auf Basis der Ähnlichkeiten in der Aminosäuresequenz in Familien eingeteilt.
Die chitinolytischen Enzyme sind auf Basis ihrer enzymatischen Wirkung auf Chitinsubstration kategorisiert. Endochitinasen sind Enzyme, die eine zufällige Spaltung an internen Stellen in der Chitinkette katalysieren. Exochitinasen katalysieren die progressive Freisetzung von Acetylchitobiose oder N-Acetylglucosamin aus dem nicht-reduzierenden Ende der Chitinkette und werden als Chitobiosidase bzw. β-N-Acetylglucosaminidase bezeichnet.
Chitinasen haben verschiedene Funktionen in verschiedenen Organismen. In Bakterien sind sie hauptsächlich an den Nährstoffprozessen beteiligt. In Hefe und in verschiedenen Pilzen sind diese Enzyme an der Morphogenese beteiligt. In Tieren und Pflanzen haben Chitinasen hauptsächlich eine schützende Rolle für die Organismen, indem sie Pathogenangriffe abwehren.

Preparation Note

Für die Herstellung der Reagenzien ist ultrareines Wasser zu verwenden.

Nur Kit-Komponenten

• Assay Buffer 25 mL
• 4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-glucosaminide 5 mg
• 4-Methylumbelliferyl β-D-N,N′-diacetylchitobioside hydrate 5 mg
• 4-Methylumbelliferyl β-D-N,N′,N′′-triacetylchitotriose 5 mg
• Chitinase from Trichoderma viride 1 mg
• 4-Methylumbelliferone Standard Solution, 50 mg/mL 1 mL
• Sodium Carbonate 2 g

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Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Danger
• Gefahrencodes: H319,H334
• Sicherheitshinweise: P261 - P264 - P280 - P284 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1
• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Was ist los?: WGK 3