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Kits für die Isolierung von Zellorganellen

Obwohl die Untersuchung von Zellen, die aus in vivo-Gewebe stammen, am aussagekräftigsten für die Zellbiologie und -funktion ist, kann die biologische Komplexität die Ergebnisse beeinträchtigen, wenn die Zielzellpopulationen nicht isoliert werden. Für die Untersuchung von Zellphänotypen haben sich verschiedene Methoden zur Isolierung von Zellpopulationen auf der Grundlage bestimmter Merkmale entwickelt. Die Isolierung von Zellpopulationen dient nicht nur der biologischen Forschung, sondern erleichtert auch klinische Diagnosetests. Die effektivsten Isolierungsmethoden zeichnen sich durch erhöhte Ausbeute, Reinheit und Lebensfähigkeit aus. Die Anreicherung oder Reinigung von Zielpopulationen kann durch Positivselektion─oft unter Verwendung von Antikörpern, die zellspezifische Marker binden─oder durch Negativselektion erreicht werden, bei der biophysikalische Eigenschaften genutzt werden können, um unerwünschte Zellen zu entfernen, damit die Zielpopulation angereichert werden kann.

Die Fraktionierung von Zellen in ihre subzellulären Komponenten ist seit langem von grundlegender Bedeutung für zellbiologische Studien. Subzelluläre Fraktionierungstechniken sind weit verbreitet, um die Struktur und Funktion von Organellen und subzellulären Kompartimenten zu untersuchen und die Lage, Verarbeitung und den Transport von Biomolekülen zu verstehen. Das Ziel der meisten Fraktionierungstechniken ist es, Organellen und zelluläre Makromoleküle in einem funktionellen Zustand zu erhalten, in dem sie ihre intrinsischen biochemischen Eigenschaften behalten. Dies wird oft durch eine Zelllyse mit sanften mechanischen Mitteln oder mit milden Detergenzien erreicht, häufig gefolgt von einer Fraktionierung der zellulären Komponenten durch differentielle Zentrifugation.


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Die Zellen sind mit Kreisen unterschiedlicher Größe gefüllt, die Lipidtröpfchen darstellen. Die sichtbaren Lipidtröpfchen und Zellen nehmen den Vordergrund des Bildes ein.

Sichtbare Lipidtropfen bestätigen die Isolierung von Präadipozyten 7 Tage nach der Differenzierung mit dem 3T3-L1 Differenzierungskit.

Organellen und subzelluläre Komplexe Isolierungskits

Die Isolierung subzellulärer Komponenten fördert das Verständnis der Organellenfunktion und kann zu neuen Biotechnologien führen. So können beispielsweise aus Säugetierzellen isolierte Zellkerne anschließend für die Synthese endogener RNA-Primärtranskripte verwendet werden. Das hoch ergiebige Nuclei EZ Prep Kit (NUC101, NUC201) wurde für die schnelle Isolierung von Zellkernen aus den meisten Säugetierzellen entwickelt.

Für den Nachweis der mitochondrialen Integrität und des Membranpotentials wurde unser Mitochondrien-Färbekit (CS0390, CS0760) verwendet den Farbstoff JC-1 (420200, T4069), der sich in der mitochondrialen Matrix anreichert und rot fluoreszierende Aggregate bildet. Ereignisse wie Apoptose, die das mitochondriale Membranpotenzial aufheben, verhindern die Anhäufung des JC-1-Farbstoffs in den Mitochondrien, so dass mit einem Fluoreszenzmikroskop zwischen lebensfähigen und geschädigten Mitochondrien unterschieden werden kann.

Auch nicht-organelluläre subzelluläre Komplexe wie Proteasomen können zur Verwendung in proteolytischen Tests isoliert werden. Bei unserer Methode werden Affinitätsmatrix-Perlen verwendet, die ein GST-Fusionsprotein mit einer ubiquitinähnlichen Domäne enthalten, die an GST-Agarose gebunden ist.



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