Test di bioburden

 Fondamenti dei test di bioburden

Il test di bioburden o test microbico è un processo di controllo della qualità che rileva e quantifica la contaminazione microbica di un prodotto in diverse fasi della produzione, cioè dalla produzione iniziale alla distribuzione finale. Un controllo di qualità efficace e risultati accurati sono essenziali per ridurre al minimo i rischi per i consumatori e sono richiesti dagli ambienti di produzione regolamentati. Pertanto, l'analisi del bioburden è spesso inclusa nei test di routine per garantire la sicurezza, la qualità e la conformità normativa di ogni lotto di prodotto fabbricato.

I test sul bioburden vengono eseguiti per dispositivi medici, prodotti farmaceutici, alimenti e bevande, acqua, imballaggi, materie prime, tessuti umani, tessuti animali e cosmetici. Quando si seguono i metodi standard, come quelli descritti di seguito, è importante garantire che il metodo di analisi non introduca batteri nel campione di prova o uccida i batteri presenti nel campione.

• Metodo di filtrazione a membrana per l'analisi della carica batterica
• Metodi di placcatura diretta per l'analisi della carica biologica
• Metodo del numero più probabile (MPN) per l'analisi della carica biologica

Metodo di filtrazione a membrana per l'analisi della carica biologica

La filtrazione a membrana è il metodo preferito per i prodotti contenenti sostanze antimicrobiche. In questo metodo, il campione viene fatto passare attraverso un filtro a membrana con pori di 0,45 µm. La membrana funge da barriera e cattura i microrganismi più grandi della dimensione dei pori della membrana. Durante la filtrazione, è possibile utilizzare il vuoto per accelerare il processo. La membrana viene quindi trasferita in un terreno di coltura e posta in un incubatore per almeno 5 giorni a 30-35 °C per la rilevazione batterica e a 20-25 °C per la rilevazione fungina. La coltura risultante viene ulteriormente enumerata per determinare i livelli di contaminazione microbica nel campione. È necessario adottare misure appropriate per evitare la contaminazione incrociata che potrebbe portare a risultati falsi positivi.

Metodi di piastratura diretta per l'analisi della carica batterica

I metodi di piastratura diretta per l'analisi della carica batterica includono i metodi della piastra di versamento e della piastra di diffusione. Il metodo della piastra di colata è preferito per la sua maggiore accuratezza teorica. Nel metodo della piastra di colata, il terreno di coltura sterilizzato viene aggiunto a una piastra Petri contenente il campione in esame e lasciato solidificare. Al contrario, nel metodo della piastra di diffusione, il campione viene aggiunto a una piastra di Petri contenente terreno di coltura sterile e solidificato. Indipendentemente dal metodo, dopo l'aggiunta del campione al sistema di coltura, la piastra viene incubata e la coltura risultante viene enumerata.

Metodo del numero più probabile (MPN) per l'analisi della carica batterica

Il metodo del numero più probabile (MPN) è un metodo quantitativo utilizzato per determinare la concentrazione batterica approssimativa in un campione. La soluzione o il campione originale viene suddiviso per ordini di grandezza (spesso 10× o 2×) in brodo di coltura e valutato per la presenza o l'assenza di microrganismi. Lo svantaggio del metodo MPN è che richiede un gran numero di repliche alla diluizione appropriata per ridurre gli intervalli di confidenza. Inoltre, il metodo è efficace solo per l'esame dei batteri e non fornisce risultati affidabili per l'enumerazione dei funghi.