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Informazioni su questo articolo
UNSPSC Code:
41116158
NACRES:
NA.54
Storage temp.:
2-8°C
usage
sufficient for 10 x 96 multiwell tests (11920685001), sufficient for 96 multiwell tests (11774425001)
manufacturer/tradename
Roche
technique(s)
ELISA: suitable
detection method
photometric
storage temp.
2-8°C
General description
Questo kit consente la quantificazione relativa di frammenti di DNA associati a istoni (mono e oligonucleosomi) presenti nel citoplasma in seguito all'induzione dell'apoptosi o rilasciati da cellule necrotiche. Poiché il test non richiede la pre-marcatura delle cellule, è in grado rilevare la degradazione del DNA genomico durante l'apoptosi anche nelle cellule che non proliferano in vitro, come ad esempio le cellule tumorali appena isolate. Gli anticorpi utilizzati nel test non sono specie-specifici, pertanto il kit può essere utilizzato per analizzare le cellule di un'ampia varietà di specie.
Application
Solo per fini di ricerca. Non usare a scopo diagnostico.
Il dosaggio immunoenzimatico fotometrico ELISAPLUS per la rilevazione della morte cellulare viene utilizzato per la determinazione quantitativa in vitro di frammenti di DNA associato a istoni (mono- e oligonucleosomi) presenti nel citoplasma dopo la morte cellulare indotta.
Il kit contiene una soluzione di stop che consente di terminare la reazione del substrato ed di eseguire il test in condizioni definite, rendendolo adatto per l'uso in applicazioni ad alto rendimento.
Il dosaggio immunoenzimatico fotometrico ELISAPLUS per la rilevazione della morte cellulare viene utilizzato per la determinazione quantitativa in vitro di frammenti di DNA associato a istoni (mono- e oligonucleosomi) presenti nel citoplasma dopo la morte cellulare indotta.
Il kit contiene una soluzione di stop che consente di terminare la reazione del substrato ed di eseguire il test in condizioni definite, rendendolo adatto per l'uso in applicazioni ad alto rendimento.
Biochem/physiol Actions
L'anticorpo anti istone reagisce con gli istoni H1, H2A, H2B, H3 e H4 di varie specie (ad es. uomo, topo, ratto, criceto, mucca, opossum, Xenopus). L'anti-DNA si lega al DNA sia a singolo che a doppio filamento. Pertanto, l'ELISA consente il rilevamento di mono e oligonucleosomi di varie specie e può essere usato per misurare la morte cellulare da apoptosi in molti sistemi cellulari diversi.
Features and Benefits
Tempo necessario: 3 - 4 ore
Controllo negativo: le colture cellulari permanenti in crescita esponenziale contengono, a seconda delle condizioni di coltura, una certa quantità di cellule morte, tipicamente circa il 3-8%. Nel test immunologico, le cellule morte presenti nel campione non trattato (cioè senza l′aggiunta di un agente che induca la morte cellulare) causeranno un certo valore di assorbanza (controllo negativo).
Controllo positivo: il controllo positivo consiste in un complesso DNA-istone.
Materiale campione: frazioni citoplasmatiche (lisati) di linee cellulari, cellule ex vivo, supernatanti di colture cellulari e siero o plasma
Controllo negativo: le colture cellulari permanenti in crescita esponenziale contengono, a seconda delle condizioni di coltura, una certa quantità di cellule morte, tipicamente circa il 3-8%. Nel test immunologico, le cellule morte presenti nel campione non trattato (cioè senza l′aggiunta di un agente che induca la morte cellulare) causeranno un certo valore di assorbanza (controllo negativo).
Controllo positivo: il controllo positivo consiste in un complesso DNA-istone.
Materiale campione: frazioni citoplasmatiche (lisati) di linee cellulari, cellule ex vivo, supernatanti di colture cellulari e siero o plasma
- ELISA one-step
- Elevata sensibilità: (5 x 102 cellule/mL)
- Di rapida esecuzione: (3-4 ore)
- Controllo positivo incluso
- Non è necessaria la pre-marcatura delle cellule
- Sistema di analisi non radioattivo
- Nessuna restrizione di specie
- Facile da usare
- Basso background
- Fattore anti-topo umano (HAMA) eliminato
- Funzione testata
Packaging
1 kit contenente 10 componenti
- 11774425001 (1 kit contenente 10 componenti)
- 11920685001 (1 kit contenente 10 componenti)
Preparation Note
Soluzione di lavoro: preparazione delle soluzioni di lavoro
Oltre alle soluzioni pronte all'uso fornite con questo kit, sarà necessario preparare le seguenti soluzioni di lavoro:
Nota: Per la ricostituzione dei liofilizzati usare solo acqua bidistillata.
Anti-istone, marcato con biotina
Ricostituire il liofilizzato in 450 μL di acqua bidistillata per 10 minuti e mescolare accuratamente.
Uso: componente dell'immunoreagente.
Anti-DNA, coniugato con perossidasi
Ricostituire il liofilizzato in 450 μL di acqua bidistillata per 10 minuti e mescolare accuratamente.
Uso: Componente dell'immunoreagente.
Controllo positivo
Ricostituire il liofilizzato in 450 μL di acqua bidistillata per 10 minuti e mescolare accuratamente.
Uso: ELISA Step 1.
Pastiglie di ABTS
A seconda del numero di campioni da analizzare, sciogliere 1, 2 o 3 compresse del flacone 7 in 5, 10 o 15 mL di tampone substrato rispettivamente.
Uso: ELISA Step 5.
Soluzione di stop per ABTS
Nel caso la soluzione fosse torbida o fosse presente del precipitato, riscaldare a 37 °C agitando fino a farla tornare limpida.
Uso: ELISA Step 6.
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): anti-istone marcato con biotina: conservare a 2 - 8 °C per 2 mesi
Pastiglie di ABTS: 1 mese, al riparo dalla luce. Lasciare riscaldare a 15°-25°C prima dell′uso.
Soluzione di stop per ABTS: conservare da 2 a 8 C fino alla data di scadenza stampata sull′etichetta.
Oltre alle soluzioni pronte all'uso fornite con questo kit, sarà necessario preparare le seguenti soluzioni di lavoro:
Nota: Per la ricostituzione dei liofilizzati usare solo acqua bidistillata.
Anti-istone, marcato con biotina
Ricostituire il liofilizzato in 450 μL di acqua bidistillata per 10 minuti e mescolare accuratamente.
Uso: componente dell'immunoreagente.
Anti-DNA, coniugato con perossidasi
Ricostituire il liofilizzato in 450 μL di acqua bidistillata per 10 minuti e mescolare accuratamente.
Uso: Componente dell'immunoreagente.
Controllo positivo
Ricostituire il liofilizzato in 450 μL di acqua bidistillata per 10 minuti e mescolare accuratamente.
Uso: ELISA Step 1.
Pastiglie di ABTS
A seconda del numero di campioni da analizzare, sciogliere 1, 2 o 3 compresse del flacone 7 in 5, 10 o 15 mL di tampone substrato rispettivamente.
Uso: ELISA Step 5.
Soluzione di stop per ABTS
Nel caso la soluzione fosse torbida o fosse presente del precipitato, riscaldare a 37 °C agitando fino a farla tornare limpida.
Uso: ELISA Step 6.
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): anti-istone marcato con biotina: conservare a 2 - 8 °C per 2 mesi
Pastiglie di ABTS: 1 mese, al riparo dalla luce. Lasciare riscaldare a 15°-25°C prima dell′uso.
Soluzione di stop per ABTS: conservare da 2 a 8 C fino alla data di scadenza stampata sull′etichetta.
L'esatto limite di rilevamento delle cellule morenti/morte in un particolare campione dipende fortemente dalla cinetica della morte cellulare, dall'agente citotossico utilizzato e dalla quantità di cellule colpite nella popolazione cellulare totale. Utilizzando come sistema modello per la morte cellulare la linea cellulare U937 e la camptotecina (CAM), il dosaggio immunologico consente la rilevazione specifica di mono e oligonucleosomi nella frazione citoplasmatica di 125 equivalenti cellulari/pozzetto.
Other Notes
Conversione delle unità: 1 mU = 1 x 10-3 OD (1 mU = 0,001 OD).
Esclusivamente per ricerche di life science. Non usare a scopo diagnostico.
Solo come componenti del kit
N° Catalogo
Descrizione
- Anti-histone-biotin antibody (clone H11-4)
- Anti-DNA-POD antibody (clone MCA-33)
- Positive Control
- Incubation Buffer
- Lysis Buffer
- Substrate Buffer
- ABTS Substrate Tablet
Vedi tutto (10)
signalword
WarningDanger
Hazard Classifications
Aquatic Chronic 2 - Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1
Classe di stoccaggio
8B - Non-combustible, corrosive hazardous materials
wgk
WGK 3
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