Fehlersuche in der Zellkultur

Fehlidentifizierung von Zelllinien

Rezente Studien schätzen, dass bis zu einem Drittel aller verwendeten Zelllinien von Fehlidentifizierungen betroffen sein könnten. Diese Entdeckungen haben das Potenzial, veröffentlichte Erkenntnisse über biologische Systeme, die auf Ergebnissen von Zelllinienmodellen beruhen, in Frage zu stellen. Zu den Faktoren, die zu einer falschen Identifizierung bzw. Kreuzkontamination von Zelllinien führen, gehören:

• Kontamination mit aggressiven Zelllinien: Isoenzymanalysen haben gezeigt, dass viele Zelllinien eine seltene Enzymisoform mit HeLa-Zellen teilen. HeLa hat sich seitdem als die häufigste invasive Zelllinie in Kulturbeständen erwiesen.
• Dokumentations- und Kennzeichnungspraktiken: Zellkulturflaschen, Platten, Kryovials und Gefrierbehälter müssen eindeutig beschriftet werden, und die Karten für die Lagerung von Flüssigstickstoff müssen streng geführt werden, um das Hinzufügen, die Entnahme und die Verlagerung von Zellbeständen zu dokumentieren.
• Zelllinienausleihe: Die gemeinsame Nutzung von Zellen in benachbarten Labors ist eine gängige Praxis, die zu Fehlern bei der Identität von Zelllinien führt. Zelllinien sollten nur von seriösen Zelllagern wie ECACC, der European Collection of Authenticated Cell Cultures bei Public Health England, bezogen werden.

Informieren Sie sich über häufige Ursachen von Zelllinien-Kreuzkontaminationen und darüber, wie Sie Ihre Arbeit vor deren Folgen schützen können.

Mikrobielle Kontamination von Zellkulturen

Zellkulturmedien und Inkubationsbedingungen bieten ein ideales Umfeld für Zellen, aber auch für bakterielle, pilzliche und virale Kontaminanten. Um die sorgfältige Einhaltung der aseptischen Kulturtechniken zu unterstützen, müssen die Kulturen regelmäßig mikroskopisch auf Anzeichen von bakteriellen und pilzlichen Eindringlingen untersucht werden. Einige allgegenwärtige mikrobielle Verunreinigungen entziehen sich dem visuellen Nachweis, so sind schätzungsweise bis zu 30 % aller Kulturen mit Mykoplasmen kontaminiert. Reagenzien und Kits, die für den Nachweis von unsichtbaren Mykoplasmen entwickelt wurden, basieren häufig auf der PCR-Amplifikation, die auch zum Nachweis viraler Kontaminationen verwendet werden kann.

Erfahren Sie, wie Sie Ihre Kulturen frei von biologischen und chemischen Verunreinigungen halten.

Schlechtes Zellwachstum

Es ist frustrierend, wenn Zellen in Kultur, die ansonsten gesund erscheinen, keine Konfluenz erreichen. Wenn Verunreinigungen ausgeschlossen sind, gibt es folgende mögliche Hindernisse für eine gesunde Zellverdopplung:

• Zustand und Qualität der Kultur-/Gefriermedien
• Qualität und Anwendungseignung von Ergänzungsmitteln
• Ungenaue Zellauszählung beim Einfrieren oder Passieren

Wenn Zellen lebensfähig erscheinen, sich aber nicht ausbreiten, sollte man Lernen Sie, was Sie tun können, um die Kulturbedingungen für optimales Wachstum zu verbessern, bevor Sie sich wieder in den flüssigen Stickstoff begeben.

Ablösung von Phänotypen adhärenter Zellen

Adhärente Zellen können sich in der Kultur spontan ablösen, einzeln oder in Platten. Wenn adhärente Kulturen nicht so bleiben, sollten Sie wissen, was zu überprüfen ist und wie man den Zusammenhalt in der Kultur wiederherstellt.

Zellverklumpung

Zellen in Suspension ahmen in vivo Bedingungen als Einzeller nach. Wenn Zellen zu verklumpen beginnen, kann dies auf klebrige Nukleinsäuren zurückzuführen sein, die im Medium vorhanden sind, wenn die Kulturen gestresst sind. Was verbirgt sich in den Medien, das zum Verklumpen der Zellen führen kann? Lesen Sie hier mehr darüber, wie man das Verklumpen aus den Kulturen verbannt.

Zelltod in der Kultur

Wenn Zellen in der Kultur sterben, muss zunächst eine Kontamination mit Mikroorganismen ausgeschlossen werden. Andere Faktoren, die zu einer schlechten Zellgesundheit oder einem Verhalten, das nicht mit dem Phänotyp übereinstimmt, beitragen können, sind u.a.:

• Eingefrorene Bestandsbedingungen
• Zahl der Zellpassagen/Überbefruchtung
• Umweltstress
• Verdauung mit Dissoziationsenzymen

Geeignete Geräte, qualifizierte Reagenzien und fachkundige Protokolle sind der Schlüssel zur Unerwartete Zellkulturresultate aufklären.

Präzipitate in Kulturmedien

Wenn es sich nicht um eine Kontamination handelt, haben Partikel in Kulturen oft eine anorganische Erklärung. Verstehen Sie ausgewogene Puffer- und Medienbestandteile und lernen Sie mehr darüber, wie man Medienbestandteile in Suspension hält.