MABT340

Anti-Protenase 3/PR3-Antikörper, Klon MCPR3-2

clone MCPR3-2, from mouse

• Synonym(e): Myeloblastin, AGP7, C-ANCA antigen, Leukocyte proteinase 3, Neutrophil proteinase 4, NP-4, P29, PR-3, PR3, Wegener autoantigen
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: mouse
• Qualitätsniveau: 100
• Konjugat: unconjugated
• Antikörperform: purified antibody
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: MCPR3-2, monoclonal
• Speziesreaktivität: human
• Darf nicht reagieren mit: mouse
• Methode(n): ELISA: suitable; affinity binding assay: suitable; flow cytometry: suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgG1κ
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_002768
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P24158
• Versandbedingung: wet ice
• Posttranslationale Modifikation Target: unmodified
• Angaben zum Gen: human ... PRTN3(5657)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Myeloblastin (EG 3.4.21.76; UniProt P24158; auch als AGP7, C-ANCA-Antigen, Leukozytenproteinase 3, Neutrophilproteinase 4, NP-4, P29, PR-3, PR3, Wegener-Autoantigen bekannt) wird beim Menschen vom PRTN3 (auch als CANCA, MBN, NP4 bekannt)-Gen (Gen-ID 5657) kodiert. Proteinase 3 (PR3) ist eine von vier neutralen Serinproteasen (Elastase, Cathepsin, PR3 und Neutrophilserinprotease 4), die als vollständig verarbeitete, reife Enzyme in Azurgranulum von menschlichen Neutrophilen gespeichert werden. Anstatt nach ihrer Synthese auf Granula gerichtet zu werden, landen einige PR3-Moleküle an der Oberfläche der neutrophilen Plasmamembran, entweder in Pro- oder reifer Form. Das Maß einer solchen Oberflächenexpression wird genetisch bestimmt, doch die Oberflächenexposition und perizelluläre Aktivität von PR3 um Neutrophile kann durch Neutrophil-Priming und -Aktivierung weiter hochreguliert werden. Der PR3-Antikörper (Anti-Neutrophile zytoplasmatische Antikörper oder ANCA) ist die wichtigste pathogene Eigenschaft bei Patienten, die an Granulomatose mit Polyangiitis (GPA; vormals Wegener-Granulomatose) leiden. ANCA aktivieren Zytokin-geprimte Neutrophile in vitro durch eine Vernetzung von oberflächenexponierten PR3- und Fcγ-Rezeptoren. Die PR3-Aktvität und/oder ihre Inaktivierung durch alpha-1-Antitrypsin/alpha-1-Proteinaseinhibitor (α1PI) variiert bei der menschlichen Population und trägt zum Risiko für GPA-Manifestationen, entweder beim Auftreten, während Rückfällen oder während der systemischen Progression, bei. PR3 wird zuerst mit einer Signalpeptidsequenz (AS 1-25), einer N-terminalen und einer C-terminalen Propeptidsequenz (AS 26-27 bzw. 249-256) erzeugt, deren Entfernen das reife Enzym erzeugt (AS 28-248).

~29 kDa gemessen. 27,81 kDa (Pro-PR3; AS 1-256), 25,14 kDa (N-terminales Signal und Propeptid entfernt; AS 28-256), 24,25 kDa (reif; AS 28-248) berechnet.

Immunogen

Epitop: “Nord-Ost” der Substratbindungstasche und neben dem Klon-MCPR3-3-Epitop (Silva, F., et al. (2010). J. Autoimmun. 35(4) 299-308).

Granulaextrakt aus HMC-1/PR3-Mastzellen, die transfiziertes menschliches Neutrophil-PR3 exprimieren (Sun, J., et al. (1998). J. Immunol. Methods. 211(1-2):111-123).

Anwendung

Anti-Protenase 3/PR3-Antikörper, Klon MCPR3-2 ist ein Antikörper gegen PR3 zur Verwendung in Affinitäts-Bindungsassay, ELISA, Durchflusszytometrie und Western Blot.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Forschungsunterkategorie
Entzündungs- & Autoimmunmechanismen

Western-Blot-Analyse: 2 µg/ml einer repräsentativen Charge wiesen 5 µg aufgereinigtes menschliches Neutrophil-PR3 sowohl unter nicht reduzierenden als auch reduzierenden Bedingungen nach (mit freundlicher Genehmigung von Amber Hummel, Mayo Clinic, Rochester, MN, USA).
Durchflusszytometrie-Analyse: Eine repräsentative Charge wies eine große Population menschlicher Neutrophile des peripheren Blutes mit Oberflächen-PR3 nach. Die gesamte Population wurde nach einer TNFα-Stimulierung positiv gefärbt (Hinkofer, L.C., et al. (2013). J. Biol. Chem. 288(37):26635-26648).
Durchflusszytometrie-Analyse: Eine repräsentative Charge band immobilisiertes rekombinantes menschliches PR3 über ein anderes Epitop als jene, die vom Klon MCPR3-3 und MCPR3-7 (Kat.-Nr. MABF973 bzw. MABT403) erkannt werden, wie durch eine FACS-Analyse eines kompetitiven Bindungsassays auf Bead-Basis bestimmt wurde (Silva, F., et al. (2010). J. Autoimmun. 35(4) 299-308).
Durchflusszytometrie-Analyse: Eine repräsentative Charge band mit rekombinantem menschlichem PR3, aber nicht mit murinem PR3 beschichtete TALON-Beads, wie durch FACS-Analyse bestimmt. (Silva, F., et al. (2010). J. Autoimmun. 35(4) 299-308).
ELISA-Analyse: Repräsentative Chargen wurden auf Well-Oberflächen immobilisiert und eingesetzt, um aufgereinigtes menschliches polymorphonukleäres Zell-PR3 oder mutiertes rekombinantes menschliches PR3-S176A einzufangen, gefolgt von einem Affinitäts-Pull-Down-Assay von PR3-Autoantikörpern (Anti-Neutrophile zytoplasmatische Antikörper oder ANCA) aus Serumproben von Patienten durch das eingefangene PR3 und den anschließenden Nachweis der gebundenen ANCA durch alkalisches Phosphatase-konjugiertes Anti-Human-IgG der Ziege (Silva, F., et al. (2010). J. Autoimmun. 35(4) 299-308; Sun, J., et al. (1998). J. Immunol. Methods. 211(1-2):111-123).
Western-Blot-Analyse: Eine repräsentative Charge wies ein exogen exprimiertes, mutiertes PR3-S176A in Lysaten von transfizierten menschlichen HMC-1-Mastzellen sowie PR3 aus menschlichen polymorphonukleären Zellen nach (Sun, J., et al. (1998). J. Immunol. Methods. 211(1-2):111-123).
Affinitäts-Bindungsassay: Eine repräsentative Charge fing ein rekombinantes menschliches PR3-Konstrukt, proP-PR3ctp, das eine pro-PR3-Konformation annimmt, und ein rekombinantes Konstrukt ΔPR3ctp-S195A, das eine reife PR3-Konformation mit ähnlicher Affinität annimmt, ein (Hinkofer, L.C., et al. (2013). J. Biol. Chem. 288(37):26635-26648).

Biochem./physiol. Wirkung

Klon MCPR3-2 wies Wildtyp-PR3 und das mutierte, katalytisch inaktive PR3-S176A nach, aber nicht neutrophile Elastase oder Cathepsin G. Klon MCPR3-2 beeinträchtigte die enzymatische Aktivität von PR3 oder seine Wechselwirkung mit α1-Proteasominhibitor/α1-PI nicht (Sun, J., et al. (1998). J. Immunol. Methods. 211(1-2):111-123). Die Verhältnisse von OD-Messungen, die mit dem PR3-komplexierten Klon MCPR3-2 für die entsprechenden OD erhalten wurden, zu den entsprechenden OD, die mit dem PR3-komplexierten Klon MCPR3-3 erhalten wurden (Kat.-Nr. MABF973), in ELISA-basierten Serum-PR3-Autoantikörper (ANCA)-Messungen korrelieren gut mit der neutralisierenden Wirkung von ANCA in Serumproben von Patienten (Silva, F., et al. (2010). J. Autoimmun. 35(4) 299-308).

Physikalische Form

Aufgereinigter monoklonaler Maus-IgG1κ-Antikörper in Puffer mit 0,1 M Tris-Glycin (pH-Wert 7,4), 150 mM NaCl mit 0,05 % Natriumazid.

Format: Aufgereinigt

Über Protein G aufgereinigt

Angaben zur Herstellung

Bei 2–8 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.

Hinweis zur Analyse

Identitätsbestätigung durch Isotypenprüfung.

Isotypenanalyse: Die Identität dieses monoklonalen Antikörpers wurde durch Isotypenprüfung als IgG1κ bestätigt.

Sonstige Hinweise

Konzentration: Siehe chargenspezifisches Datenblatt.

Haftungsausschluss

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