APT403

CaspaTag Caspase 3,7 In Situ Assay Kit, fluoresceina

The In Situ Caspase Detection Kit for Flow Cytometry use a novel approach to detect active caspases. The methodology is based on Fluorochrome Inhibitors of Caspases (FLICA).

• UNSPSC Code: 12161503
• NACRES: NA.84
• eCl@ss: 32161000

Właściwości

• Quality Segment: 100
• species reactivity (predicted by homology): mammals
• manufacturer/tradename: CaspaTag, Chemicon^®
• technique(s): activity assay: suitable, flow cytometry: suitable
• NCBI accession no.: NM_004346.3, NM_032991.2
• UniProt accession no.: P42574, Q14790
• detection method: fluorometric
• shipped in: wet ice
• Gene Information: human ... CASP3(836)

Opis

General description

Apoptoza jest ewolucyjnie zachowaną formą samobójstwa komórek, która następuje w wyniku wyspecjalizowanego procesu komórkowego. Centralnym elementem tego procesu jest kaskada enzymów proteolitycznych zwanych kaspazami. Enzymy te uczestniczą w serii reakcji, które są wyzwalane w odpowiedzi na sygnały proapoptotyczne i powodują rozszczepienie substratów białkowych, powodując demontaż komórki (Slee i in. 1999).

Kaspazy zostały zidentyfikowane w organizmach od C. elegans do ludzi. Kaspazy ssaków odgrywają różne role w apoptozie i zapaleniu. W apoptozie, kaspazy są odpowiedzialne za proteolityczne rozszczepienia, które prowadzą do rozpadu komórki (kaspazy efektorowe) i są zaangażowane w poprzedzające zdarzenia regulacyjne (kaspazy inicjatorowe). Aktywna kaspaza składa się z dwóch dużych i dwóch małych podjednostek, które tworzą dwa heterodimery łączące się w tetramer (Walker i wsp. 1994; Wilson i wsp. 1994; Rotonda i wsp. 1996). Podobnie jak inne proteazy, kaspazy są syntetyzowane jako prekursory, które ulegają dojrzewaniu proteolitycznemu, autokatalitycznie lub w kaskadzie przez enzymy o podobnej specyficzności (Kumar 1999).

Enzymy kaspazowe specyficznie rozpoznają sekwencję 4 lub 5 aminokwasów na docelowym substracie, który koniecznie zawiera resztę kwasu asparaginowego. Reszta ta jest celem rozszczepienia, które zachodzi na karbonylowym końcu reszty kwasu asparaginowego (Thornberry et al. 1997). Kaspazy mogą być wykrywane poprzez immunoprecypitację, techniki immunoblottingu przy użyciu przeciwciał specyficznych dla kaspaz lub poprzez zastosowanie substratów fluorochromowych, które stają się fluorescencyjne po rozszczepieniu przez kaspazę.

Zasada testu:

Zestawy CHEMICON do wykrywania kaspaz in situ wykorzystują nowatorskie podejście do wykrywania aktywnych kaspaz. Metodologia opiera się na fluorochromowych inhibitorach kaspaz (FLICA). Inhibitory są przepuszczalne dla komórek i niecytotoksyczne. Po wejściu do komórki inhibitor wiąże się kowalencyjnie z aktywną kaspazą (Ekert et al. 1999). Ten zestaw wykorzystuje znakowany karboksyfluoresceiną fluorometyloketonowy peptydowy inhibitor kaspazy-3 (FAM-DEVD-FMK), który wytwarza zieloną fluorescencję. Po dodaniu do populacji komórek, sonda FAM-DEVD-FMK wchodzi do każdej komórki i kowalencyjnie wiąże się z reaktywną resztą cysteiny, która znajduje się na dużej podjednostce aktywnego heterodimeru kaspazy, hamując w ten sposób dalszą aktywność enzymatyczną. Związany znakowany odczynnik jest zatrzymywany w komórce, podczas gdy niezwiązany odczynnik dyfunduje z komórki i jest wypłukiwany. Zielony sygnał fluorescencyjny jest bezpośrednią miarą ilości aktywnej kaspazy-3 lub kaspazy-7 obecnej w komórce w momencie dodania odczynnika. Komórki zawierające związany znakowany odczynnik mogą być analizowane za pomocą fluorometrii opartej na płytkach 96-dołkowych, mikroskopii fluorescencyjnej lub cytometrii przepływowej.

Zastosowanie:

CHEMICON In Situ FLICA Caspase-3/7 Detection Kit to oparty na fluorescencji test do wykrywania aktywnej kaspazy-3 lub kaspazy-7 w komórkach przechodzących apoptozę. Zestaw jest przeznaczony wyłącznie do użytku badawczego. Nie jest przeznaczony do stosowania w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych.

Application

Zestaw In Situ Caspase Detection Kit do cytometrii przepływowej wykorzystuje nowatorskie podejście do wykrywania aktywnych kaspaz. Metodologia opiera się na fluorochromowych inhibitorach kaspaz (FLICA).

Research Category
Apoptosis & Cancer

Preparation Note

- Nieotwarte materiały zestawu należy przechowywać w temperaturze 2-8°C do daty ich ważności.

- Odtworzony odczynnik FLICA (150X) należy zamrozić w temperaturze -20°C na okres do 6 miesięcy i w tym czasie można go dwukrotnie rozmrozić. W razie potrzeby rozdzielić do oddzielnych bursztynowych probówek. Chronić przed światłem przez cały czas.

- Przechowywać rozcieńczony (1X) bufor płuczący w temperaturze do -20ºC przez 2 tygodnie.

Other Notes

FLICA Reagent (FAM-DEVD-FMK): Four lyophilized vials

10X Wash Buffer: 60 mL

Fixative: 6 mL

Propidium Iodide: 1 mL at 250 μg/mL, ready-to-use

Hoechst Stain: 1 mL at 200 μg/mL, ready-to-use

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• pictograms: GHS06,GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H302 + H312,H315,H317,H319,H331,H335,H341,H350,H371
• pcodes: P280 - P301 + P312 - P302 + P352 + P312 - P304 + P340 + P311 - P305 + P351 + P338 - P308 + P311
• Hazard Classifications: Acute Tox. 3 Inhalation - Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Oral - Carc. 1B - Eye Irrit. 2 - Muta. 2 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 2 - STOT SE 3
• target_organs: Eyes,Central nervous system, Respiratory system
• Klasa składowania: 6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects