มาตรฐานอ้างอิงสำหรับการวิเคราะห์โพลีฟีนอล Catechins

James S, Walbridge, Kathleen Kiefer

Reporter US Vol 25.4

[email protected]

catechins ได้กลายเป็นหัวข้อที่ร้อนแรงในโลกที่ใส่ใจสุขภาพในปัจจุบัน การวิจัยในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่า catechins ช่วยสุขภาพโดย:

• ลดการก่อตัวของโล่ Athersclerotic
• ยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอกโดยการยับยั้งเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งกำจัดสารที่ส่งเสริมการเจริญเติบโตของเนื้องอกและยับยั้งสารก่อมะเร็งทางเคมี
• ลดความดันโลหิตสูง
• ป้องกันการติดเชื้อทางเดินอาหารและทางเดินหายใจ
• ลดระดับคอเลสเตอรอล
• ลดระดับน้ำตาลในเลือด
• การป้องกันนิ่วในไต
• ลดโอกาสในการเกิดโรคข้ออักเสบรูมาตอยด์
• สร้างกระดูกที่แข็งแรงขึ้น
• Reducing inflammation

catechins เป็นกลุ่มของสารประกอบโพลีฟีนอลที่แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งเช่นเดียวกับคุณสมบัติต้านเชื้อแบคทีเรียที่โดดเด่นต้านไวรัสและต้านการอักเสบ พวกเขาพบในความเข้มข้นสูงในใบของ Camellia sinensis (ชา) และในปริมาณที่น้อยในช็อคโกแลต, องุ่น, ราสเบอร์รี่, แอปเปิ้ล, ลูกแพร์, และไวน์ ใบอ่อนและต้นอ่อนของ Camellia sinensis ที่ใช้ในการทำชาขาวมีความเข้มข้นสูงสุดตามด้วยใบที่โตเต็มที่กว่าเล็กน้อยที่ใช้ในการทำชาเขียว ใบเก่าที่ใช้ในการทำชาอูหลงและชาดำจะออกซิไดซ์มากขึ้นและมีโพลีฟีนอลอื่นๆที่มีความเข้มข้นสูงขึ้นรวมถึง theaflavanins และ thearubigins

catechins เช่นเดียวกับสารต้านอนุมูลอิสระอื่นๆช่วยปกป้องเซลล์จากความเครียดออกซิเดชัน ออกซิเจนมีความสำคัญต่อชีวิตอย่างไรก็ตามมันยังรวมอยู่ในสายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยารวมทั้งไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์กรด hypochlorous และอนุมูลอิสระเช่นอนุมูลอิสระ hydroxyl และไอออน superoxide สายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยาทำลายเซลล์และมีส่วนเกี่ยวข้องในปฏิกิริยาลูกโซ่ช้าของความเสียหายที่นำไปสู่โรคหัวใจมะเร็งและโรคอื่นๆอีกมากมาย สารต้านอนุมูลอิสระทำงานโดยการป้องกันการก่อตัวของสายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยาหรือโดยการทำปฏิกิริยากับพวกเขาก่อนที่พวกเขาจะสามารถทำลายเซลล์

ใบของ Camellia sinensis มี catechins polyphenol อย่างน้อยแปด สารสกัดจากต้นชาทั้งหกชนิดได้แก่ catechin, gallocatechin gallate(GC), epigallocatechin (EGC), epicatechin (EC), epicatechin gallate (ECG) และ epigallocatechin gallate (EGCG) ซึ่ง EGCG มีความอุดมสมบูรณ์มากที่สุด

Analytical Challenge

นักวิเคราะห์ที่กำหนดความเข้มข้นของ catechin ถูกท้าทายจากการขาดโซลูชันอ้างอิง catechin ที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ ทางเลือกหนึ่งคือการเตรียมมาตรฐานอ้างอิงในบ้านจากสารประกอบ catechin แต่ละ ซึ่งโดยทั่วไปแล้วจะไม่ใช่โซลูชันที่คุ้มค่าเนื่องจากสาเหตุต่อไปนี้:

• สารประกอบ catechin ความบริสุทธิ์สูงมักหายากและมีราคาแพงมาก
• catechins ทั้งเรียบร้อยและในการแก้ปัญหาต้องมีการจัดเก็บที่เหมาะสม
• ซึ่งไวต่อความร้อนแสงและอากาศ
• การเตรียมมาตรฐานเป็นกระบวนการที่ใช้เวลานาน

Our Solution

เพื่อตอบสนองความต้องการนี้จึงได้มีการพัฒนาโซลูชันมาตรฐานอ้างอิงเชิงวิเคราะห์ของ catechin แปดโซลูชัน มาตรฐานของแบรนด์ Supelco เหล่านี้ได้รับการจัดเตรียมจ่ายบรรจุและจัดเก็บเพื่อลดการเสื่อมสภาพของสารเคมีและให้อายุการเก็บรักษาสูงสุด แต่ละมาตรฐานมาพร้อมกับใบรับรองการวิเคราะห์ที่มีการกำหนดความบริสุทธิ์ นอกจากนี้ Catechins ยังอาจได้รับการเตรียมในการรวมกันของความเข้มข้นส่วนประกอบและตัวทำละลายโดยเฉพาะโดยใช้โปรแกรมมาตรฐานทางเคมีที่กำหนดเองของเรา นอกจากนี้ยังมีการพัฒนาวิธีการ LC-UV ที่เรียบง่ายและมีประสิทธิภาพโดยใช้คอลัมน์ Ascentis RP-amide (รูปที่ 1) วิธีการนี้ยังสามารถใช้งานร่วมกับการตรวจจับ MS ได้อีกด้วย ให้ผลการวิเคราะห์ที่สามารถทำซ้ำได้และรูปร่างที่ดีที่สุด

รูปที่ 1 การวิเคราะห์ HPLC ของ Catechins ชาเขียวหลัก565324ตัว (1-U)

ข้อมูลอ้างอิง

1. Zhu X, Chen B, Ma M, Luo X, Zhang F, Yao S, Wan Z, Yang D, Hang H. 2004. Simultaneous analysis of theanine, chlorogenic acid, purine alkaloids and catechins in tea samples with the help of multi-dimension information of on-line high performance liquid chromatography/electrospray?mass spectrometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 34(3):695-704. https://doi.org/10.1016/s0731-7085(03)00605-8

2. Bell DS, Campbell W, Cramer HM. Molecular Interactions Contributing to Alternative Selectivity of Polar-Embedded HPLC Stationary Phases. Supelco Publication. T405014

3. Lun Su Y, Leung LK, Huang Y, Chen Z. 2003. Stability of tea theaflavins and catechins. Food Chemistry. 83(2):189-195. https://doi.org/10.1016/s0308-8146(03)00062-1

4. Friedman M, Jürgens HS. 2000. Effect of pH on the Stability of Plant Phenolic Compounds. J. Agric. Food Chem.. 48(6):2101-2110. https://doi.org/10.1021/jf990489j

5. American Chemical Society. [Internet]. Available from: http://pubs.acs.org/journals/jafcau/index

6. American Chemical Society. [Internet]. Available from: http://pubd.scs.org/journals/jacau/index.html

7. He L, Penzotti S, Bedu-Addo F. Cardinal Health Pharmaceutical Development. 14 Schoolhouse Road, Somerset, NJ 08873..