ระบบโปรโมเตอร์ T7

• What Is the T7 Promoter Sequence?
• T7 Plasmid Expression System คุณสมบัติ
• เทคโนโลยี Mat ™ Tag
• คู่มือระบบผู้ส่งเสริมและการแสดงออก T7

  

โปรโมเตอร์ T7 เป็นลำดับของ DNA 18^{1 คู่ฐานยาวถึงไซต์เริ่มต้นการถอดสคริปต์ที่ +1 (2 ' - TAATACGACTCACTATAG - 5 ') ที่ได้รับการยอมรับจาก T7 RNA polymerase 3}  โปรโมเตอร์ T7 มักใช้ในการควบคุมการแสดงออกของยีนของโปรตีน recombinant ซึ่งต่อมาสามารถใช้สำหรับการใช้งานวิจัยปลายน้ำ^{ที่หลากหลาย 2}

 T7 Plasmid Expression System คุณสมบัติ

เวกเตอร์ที่ใช้โปรโมเตอร์แบคทีเรีย T7 ช่วยให้สามารถแสดงออกตรวจจับและทำให้บริสุทธิ์ของแฟล็ก^® และ MAT ™ (แท็กความสัมพันธ์ของโลหะ) ใน E. coli เวกเตอร์หลายตัวที่มีโปรโมเตอร์ T7 มีตัวเลือกแท็กคู่สำหรับ โปรตีนฟิวชั่นที่ติดแท็กด้วย Flag ® และ MAT ™ เวกเตอร์เหล่านี้จะช่วยให้สามารถเลือกความต้านทานแอมพิซิลินได้ง่ายสำหรับการเลือกตัวแปลงสัญญาณที่เป็นบวก นอกจากนี้เวกเตอร์ยังประกอบด้วยเทอร์มิเนเตอร์แบบ Transcriptional T1T2, pMB1 (อนุพันธ์ของ pBR322) ที่มาของการจำลองแบบ, ที่มา F1 และยีน lacI สำหรับการปราบปรามโปรโมเตอร์ T7

 เวกเตอร์ PT7-flag ® และ PT7-MAT ™นำเสนอโปรโมเตอร์ T7/Lac ที่แข็งแกร่งมาก เวกเตอร์นิพจน์เหล่านี้ให้อัตราผลตอบแทนที่สูงขึ้นของโปรตีน recombinant กว่าระบบโปรโมเตอร์ TAC อย่างไรก็ตามโปรโมเตอร์ T7 เป็นที่รู้จักสำหรับการแสดงออกของพื้นหลัง ("leaky") ซึ่งอาจเป็นข้อเสียเปรียบเมื่อโปรตีน recombinant เป็นพิษต่อเซลล์โฮสต์ ดังนั้นเวกเตอร์ของเราจึงมีลำดับ Lac operator (Laco) อยู่ในลำดับถัดลงมาจากโปรโมเตอร์ทันทีเพื่อลดการแสดงออกที่รั่วไหล ซึ่งแตกต่างจากระบบโปรโมเตอร์ TAC เวกเตอร์ PT7 จะต้องแสดงในโฮสต์ที่มีแหล่งที่มาของโพลิเมอร์ T7 เช่นสายพันธุ์ lysogenic (DE3)

 เทคโนโลยี Mat ™ Tag

แท็ก MAT ™หรือแท็กความสัมพันธ์ของโลหะ (HNHRHKH) ถูกสร้างขึ้นเพื่อทำให้โปรตีนฟิวชั่นของ MAT ™ที่รีคอมบิแนนท์บริสุทธิ์โดยใช้เจลความสัมพันธ์ของนิกเกิลและโคบอลต์ที่เขาเลือก ผลิตภัณฑ์ของ HIS-Select ช่วยให้สามารถคัดกรองโปรตีนฟิวชั่นที่ติดแท็กด้วย histidine เช่น fusions ของ MAT ™ เวกเตอร์ใหม่ล่าสุดหลายตัวของเราใช้ประโยชน์จากแท็ก MAT ™ซึ่งมักใช้ร่วมกับ แท็ก flag ® ที่รู้จักกันดี แท็ก Mat ™ที่มีเวกเตอร์มีอยู่ในรูปแบบสำหรับการติดแท็กเทอร์มินัล N หรือ C-terminal

รูปที่ 1 ยีน kanamycin และยีน ampicillin เพื่อความยืดหยุ่นในการเลือกมากขึ้นใน E. coli

ข้อมูลอ้างอิง

1. Rong M, He B, McAllister WT, Durbin RK. 1998. Promoter specificity determinants of T7 RNA polymerase. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95(2):515-519. https://doi.org/10.1073/pnas.95.2.515

2. Komura R, Aoki W, Motone K, Satomura A, Ueda M. High-throughput evaluation of T7 promoter variants using biased randomization and DNA barcoding. PLoS ONE. 13(5):e0196905. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0196905