Bioburden-Tests

 Grundlagen der Bioburden-Prüfung

Die Bioburden-Prüfung oder mikrobielle Prüfung ist ein Qualitätskontrollverfahren, mit dem die mikrobielle Verunreinigung eines Produkts in verschiedenen Phasen der Produktion, d. h. von der Herstellung bis zum Vertrieb, nachgewiesen und quantifiziert wird. Eine wirksame Qualitätskontrolle und genaue Testergebnisse sind unerlässlich, um die Risiken für die Verbraucher zu minimieren, und werden von regulierten Produktionsumgebungen verlangt. Daher gehört die Bioburden-Analyse häufig zu den Routineprüfungen, um die Sicherheit, Qualität und Einhaltung der Vorschriften für jede hergestellte Produktcharge zu gewährleisten.

Bioburden-Tests werden für Medizinprodukte, Arzneimittel, Lebensmittel und Getränke, Wasser, Verpackungen, Rohstoffe, menschliches Gewebe, tierisches Gewebe und Kosmetika durchgeführt. Bei der Anwendung von Standardmethoden, wie sie im Folgenden beschrieben werden, muss sichergestellt werden, dass durch die Testmethode keine Bakterien in die Testprobe eingebracht oder Bakterien in der Testprobe abgetötet werden.

• Membranfiltrationsmethode für Bioburden-Tests
• Direkte Ausplattierungsmethoden für Bioburden-Tests
• Most Probable Number (MPN)-Methode für Bioburden-Tests

Membranfiltrationsverfahren für die Bioburdenprüfung

Membranfiltration ist die Methode der Wahl für Produkte, die antimikrobielle Substanzen enthalten. Bei dieser Methode wird die Probe durch einen Membranfilter mit einer Porengröße von 0,45 µm geleitet. Die Membran fungiert als Barriere und fängt Mikroorganismen ab, die größer als die Porengröße der Membran sind. Während der Filtration kann ein Vakuum verwendet werden, um den Prozess zu beschleunigen. Die Membran wird dann in ein Nährmedium überführt und für mindestens 5 Tage bei 30-35 °C für den Nachweis von Bakterien und bei 20-25 °C für den Nachweis von Pilzen in einen Inkubator gelegt. Die resultierende Kultur wird weiter ausgezählt, um den Grad der mikrobiellen Kontamination in der Probe zu bestimmen. Es sollten geeignete Maßnahmen ergriffen werden, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden, die zu falsch-positiven Ergebnissen führen könnten.

Direkte Ausplattierungsmethoden für Bioburden-Tests

Zu den direkten Ausplattierungsmethoden für Bioburden-Tests gehören die Pour-Plate- und Spread-Plate-Methode. Die Pour-Plate-Methode wird aufgrund ihrer höheren theoretischen Genauigkeit bevorzugt. Bei der Gießplattenmethode wird das sterilisierte Kulturmedium in eine Petrischale mit der Testprobe gegeben und erstarren gelassen. Im Gegensatz dazu wird bei der Ausstrichmethode die Probe in eine Petrischale mit sterilem, verfestigtem Nährmedium gegeben. Unabhängig von der Methode wird die Platte nach Zugabe der Probe zum Kultursystem bebrütet und die entstandene Kultur ausgezählt.

Most Probable Number (MPN)-Methode für Bioburden-Tests

Die Most Probable Number (MPN)-Methode ist eine quantitative Methode zur Bestimmung der ungefähren Bakterienkonzentration in einer Probe. Die ursprüngliche Lösung oder Probe wird um Größenordnungen (häufig 10× oder 2×) in Kulturbrühe unterteilt und auf das Vorhandensein oder Fehlen von Mikroorganismen untersucht. Der Nachteil der MPN-Methode besteht darin, dass eine große Anzahl von Wiederholungen in der entsprechenden Verdünnung erforderlich ist, um die Konfidenzintervalle einzuengen. Außerdem ist die Methode nur für die Untersuchung von Bakterien geeignet und liefert keine zuverlässigen Ergebnisse für die Auszählung von Pilzen.