LIBDH-RO

Liberase^™ DH, Forschungsqualität

lyophilized, optimum pH 7.4, optimum reaction temp. 35-37 °C

• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 12352204
• Biological source: enzyme from Bacillus polymyxa (Protease), enzyme from Clostridium histolyticum (collagenase)

Eigenschaften

• biological source: enzyme from Bacillus polymyxa (Protease), enzyme from Clostridium histolyticum (collagenase)
• description: high Dispase concentration
• form: lyophilized
• packaging: pkg of 10 mg (05401054001 [2 x 5 mg]), pkg of 100 mg (05401089001 [2 x 50 mg])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 35-37 °C optimum reaction temp.
• technique(s): activity assay: suitable
• color: white
• optimum pH: 7.4
• solubility: water: soluble
• application(s): life science and biopharma
• foreign activity: Endotoxin 3 EU/mg
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Das gebräuchlichste Verfahren für Dezellularisierungsprozesse, wie z.B. Gewebedissoziation und Zellernte, beruht auf der Anwendung proteolytischer Enzyme. Proteasen zerstören die extrazelluläre Matrix von Gewebe und ermöglichen die Freisetzung einzelner Zellen oder die Ernte kultivierter Zellen für den Transfer. Das Ziel der Zellisolierung ist die Maximierung der Ausbeute an dissoziierten Zellen, die lebensfähig und funktionell aktiv sind.
Die Liberase-Enzymtechnologie umfasst Methoden zur Aufreinigung clostridialer Collagenase-Isoformen zu hoher spezifischer Aktivität und zu deren Mischung mit neutralen Proteasen hoher spezifischer Aktivität in optimalen Verhältnissen für die effektive Dissoziation primärer Gewebe und kultivierter Zellen. Liberase DH in Forschungsqualität enthält hochreine Collagenase I und Collagenase II. Diese beiden Collagenase-Isoformen werden in einem genauen Verhältnis aufeinander und mit einer hohen Konzentration an Dispase^®, einer nicht clostridialen, neutralen Protease, abgestimmt.
Liberase-Enzyme erhöhen die Qualität und Reproduzierbarkeit der Gewebedissoziation und verbessern die Viabilität und Funktionalität isolierter Zellen. Aufgereinigte Liberase-Enzymmischungen ersetzen die traditionelle Collagenase, bei der es sich um ein rohes und variables Fermentationsprodukt von Clostridium histolyticum handelt.

Application

Liberase^™ DH (Dispase High) in Forschungsqualität wird für die Auftrennung vieler Gewebetypen in Anwendungen eingesetzt, in denen die hohe Reinheit der Enzymmischung für eine hohe Ausbeute und Lebensfähigkeit der Zellen notwendig ist. Bakterien-Abbauprodukte wie Endotoxine werden bis auf mehrere Tausendstel reduziert.
Die Lösung wurde für den Verdau metastatischer Tumorfragmente verwendet.[1] Sie wurde außerdem für die enzymatische Ablösung humaner embryonaler Stammzellkolonien eingesetzt.[2]

Features and Benefits

• Maximale Ausbeute und Lebensfähigkeit isolierter Zellen

mit einer Enzymmischung, die weniger Clostripain- und Trypsinaktivität aufweist und weniger Endotoxine enthält.

• Höhere spezifische Aktivität der Enzymmischung

aufgrund der höheren Reinheit der Collagenase I + II (mittels HPLC-Analyse bestimmt).

• Höhere Versuchsreproduzierbarkeit

aufgrund höherer Chargenkonstanz.

Preparation Note

Stabilisatoren: Calcium
Arbeitskonzentration für Liberase-Enzyme in Forschungsqualität:

Liberase-Enzyme verfügen über eine signifikant höhere spezifische Aktivität als herkömmliche Collagenasen. Dies bedeutet, dass die Arbeitskonzentration der aufgereinigten Liberase-Enzyme, in mg/ml angegeben, geringer ist als die von herkömmlichen Collagenasen.

Wenn die Anwendung auf der Liste der Anwendungen von Roche unter www.collagenase.com enthalten ist, verwenden Sie die für diese Anwendung empfohlene Konzentration von Liberase-Enzymen in Forschungsqualität.

Wenn die Anwendung nicht in der Liste aufgeführt ist, verwenden Sie Liberase DM in Forschungsqualität zunächst in einer Konzentration von 0,08–0,28 Wünsch-Einheiten/ml.

Ziel ist es, die beste Startkonzentration der Liberase-Enzymmischungen zu bestimmen. Dies ist der Ausgangspunkt. Die endgültige Konzentration kann in Abhängigkeit von Verfahrens- und Chargenunterschieden bei herkömmlichen Collagenasen variieren.

Collagenase-Arbeitskonzentration

Multiplizieren Sie Ihre vorherige Collagenase-Arbeitskonzentration (mg/ml) mit ihrer spezifischen Aktivität (Wünsch-Einheiten/mg, [wie oben bestimmt]), um Wünsch-Einheiten/ml zu erhalten. Zur Bestimmung des erforderlichen Volumens an Liberase-Enzymmischung multiplizieren Sie zuerst Ihre Collagenase-Arbeitskonzentration (in Wünsch-Einheiten/ml) mit dem Gesamtvolumen Ihrer Enzym-Arbeitslösung, um die erforderliche Gesamtaktivität der Collagenase zu ermitteln (Wünsch-Einheiten). Dividieren Sie dann die erforderliche Gesamtaktivität der Collagenase durch die Konzentration der Liberase-Stammlösung („Rekonstituierung und Lagerung“). Das Ergebnis gibt an, wie viele Milliliter Stammlösung der Liberase-Enzymmischung für Ihre Enzym-Arbeitslösung verwendet werden müssen.


Lagerbedingungen (Arbeitslösung): Bewahren Sie nicht verwendete Stammlösung in Aliquoten für den Einmalgebrauch bei -15 bis -25 °C auf. Weitere Informationen zur Produktstabilität finden Sie auf der Roche Liberase-Enzym-Website unter www.collagenase.com.

Hinweis: Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden.

Rekonstituieren Sie das lyophilisierte Enzym mit sterilem Wasser für Injektionszwecke oder mit Gewebedissoziationspuffer. Geben Sie kein Serum oder andere Komponenten (z.B. Albumin oder Proteasehemmer) zum Dissoziationspuffer hinzu. Die Enzymstabilität ist bei höheren Konzentrationen und wärmeren Temperaturen (4 °C) verringert. Vermeiden Sie diese beiden Bedingungen.

Rekonstituieren Sie den gesamten Inhalt des Fläschchens. Wiegen Sie keine Einzelportionen des Lyophilisats ab. Wenn Feuchtigkeit in das Fläschchen gelangt, verringert sich die Enzymaktivität.

Bewahren Sie das Fläschchen während der Rehydrierung des lyophilisierten Enzyms auf Eis auf.

Schütteln Sie das Fläschchen vorsichtig bei 2 bis 8 °C, bis sich das Enzym vollständig aufgelöst hat (max. 30 min).

Je nach Gewebedissoziationspuffer, der zum Auflösen gereinigter Liberase-Enzymmischungen in Forschungsqualität verwendet wird, sind ggf. geringfügige Ausfällungen sichtbar, die sich in der verdünnten Arbeitslösung leicht auflösen und die Enzymaktivität nicht beeinflussen.

Entnehmen Sie ein Aliquot der Stammlösung, um die Arbeitslösung herzustellen.

Rekonstituierungsvolumen

2 ml (1 Fläschchen mit 5 mg-10 mg)
10 ml (1 Fläschchen mit 50 mg–100 mg)

Collagenase Wünsch (Einheiten/ml)

13 (1 Fläschchen mit 5 mg-10 mg)
26 (1 Fläschchen mit 50 mg–100 mg)

Gesamtkonzentration Collagenase [mg/ml]

2,5 (1 Fläschchen mit 5 mg–10 mg)
5,0 (1 Fläschchen mit 50 mg–100 mg)

Trocken lagern

Other Notes

• Dieses Produkt ist ausschließlich zur Anwendung in der Life-Science-Forschung und In-vitro-Diagnostik vorgesehen. Diese Produkte dürfen nicht für diagnostische oder klinische Anwendungen wie humane Inselzelltransplantationen eingesetzt werden.
• Alle Liberase und Liberase Blendzyme-Produkte der 1. Generation (Liberase HI, CI, RI, PI, Liberase Blendzyme 1, 2, 3, 4) wurden durch die 2 Generation der Liberase-Enzymmischungen in Forschungsqualität und in GMP-Qualität ersetzt. Anleitungen zur Umstellung von den vormaligen Liberase-Enzymen

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Legal Information

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.

Liberase is a trademark of Roche

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H319,H334