Analyse der Zellgesundheit

Zelllebensfähigkeit und Proliferationsassays

Assays zur Messung der Zellproliferation und Lebensfähigkeit werden verwendet, um die Reaktion und den Gesundheitszustand von Zellen in Kultur nach Behandlung mit verschiedenen Stimuli zu überwachen. Die Wahl der geeigneten Assay-Methode hängt von der Anzahl und der Art der zu untersuchenden Zellen sowie von dem erwarteten Ergebnis ab. Zellproliferationstests können die Anzahl der Zellen im Zeitverlauf, die Anzahl der Zellteilungen, die Stoffwechselaktivität oder die DNA-Synthese überwachen. Die Zellzählung unter Verwendung von Lebensfähigkeitsfarbstoffen wie Trypanblau oder Calcein-AM kann sowohl die Proliferationsrate als auch den Prozentsatz lebensfähiger Zellen liefern. 5(6)-Carboxyfluorescein-Diacetat-N-succinimidyl-Ester (CFSE) (21888, SCT110) ist ein beliebtes Mittel zur Messung der Anzahl der Zellteilungen, die eine Population durchlaufen hat. Beim Eintritt in die Zelle wird CFSE durch intrazelluläre Esterasen gespalten, um die fluoreszierende Verbindung zu bilden, und die Succinimidylestergruppe reagiert kovalent mit primären Aminen auf intrazellulären Proteinen. Bei jeder Teilung halbiert sich die Fluoreszenzintensität jeder Tochterzelle, so dass die Anzahl der Zellteilungen mit Hilfe der Durchflusszytometrie einfach festgestellt werden kann.

Zytotoxizitätsassays

Assays, die die Stoffwechselaktivität messen, eignen sich für die Analyse von Proliferation, Lebensfähigkeit und Zytotoxizität. Die Reduktion von Tetrazoliumsalzen wie MTT und XTT zu farbigen Formazanverbindungen oder die Bioreduktion von Resazurin (R7017, TOX8) findet nur in metabolisch aktiven Zellen statt. Aktiv proliferierende Zellen erhöhen ihre Stoffwechselaktivität, während gestörte Zellen, wie z.B. solche, die Toxinen ausgesetzt sind, eine verringerte Aktivität aufweisen.

Apoptose-Assays

Der Zelltod ist für viele normale physiologische Funktionen sowohl im Verlauf der Entwicklung als auch der Homöostase notwendig. Die Fähigkeit von Tumorzellen, sich dem programmierten Zelltod, auch Apoptose genannt, zu entziehen, ist ein Markenzeichen der meisten Krebsarten. Eine Vielzahl von zellulären Proteinen, darunter Zelloberflächenrezeptoren, Adaptoren, Proteasen und mitochondriale Komponenten, regulieren das feine Gleichgewicht zwischen Zellüberleben und Zelltod durch Apoptose. Eine durchdachte Auswahl von Assays kann dazu beitragen, nicht nur die Auswirkungen von Zellkulturbedingungen und Behandlungen auf die Zellgesundheit zu analysieren, sondern auch die Mechanismen, durch die sie die Zellgesundheit beeinflussen. Wir bieten eine vollständige Palette von Assay-Produkten für die frühe, mittlere und späte Apoptose-Detektion.

Erkennung und Beseitigung von Zellkontaminationen

Die Aufrechterhaltung von kontaminationsfreien Zellkulturen ist für die zellbasierte Forschung von grundlegender Bedeutung. Eines der häufigsten Probleme bei Zellkulturen ist die Kontamination mit Mykoplasmen, einer Bakteriengattung, deren Morphologie sich durch eine Größe im Submikronbereich und das Fehlen einer Zellwand auszeichnet, so dass diese Bakterien mikroskopisch nur schwer oder gar nicht zu erkennen sind und gegen viele Antibiotika resistent sind. Obwohl Mykoplasmen in der Regel nicht zum Zelltod führen, sind sie für eine Vielzahl von Auswirkungen auf kultivierte Zellen verantwortlich, darunter ein gestörter Stoffwechsel, eine verringerte Proliferation und Chromosomenaberrationen. Kurz gesagt, eine Kontamination mit Mykoplasmen beeinträchtigt die Aussagekraft der betroffenen Zelllinien für die Bereitstellung aussagekräftiger Daten für die biowissenschaftliche Forschung.