Epigenetica

Modifica degli istoni

La cromatina è il complesso di DNA genomico e proteine associate nel nucleo. Le modifiche della struttura della cromatina e l'interazione delle proteine della cromatina svolgono un ruolo diretto nella regolazione epigenetica. La struttura della cromatina è facilitata dagli istoni, una delle principali classi di proteine della cromatina. Gli istoni formano il nucleosoma, un complesso contenente 2 subunità ciascuna degli istoni H2A, H2B, H3 e H4. All'esterno del complesso centrale, l'istone linker H1 occupa il DNA internucleosomico. Questo complesso di nucleosomi mantiene la struttura compattata della cromatina. Le modificazioni istoniche sito-specifiche, come la metilazione, l'acetilazione, la fosforilazione, l'ubiquitinazione e la citrullinazione, possono alterare la struttura locale della cromatina e regolare la trascrizione, la riparazione, la ricombinazione e la replicazione. Le proteine non istoniche associate alla cromatina sono un gruppo eterogeneo con migliaia di tipi di proteine diverse, tra cui fattori di trascrizione, polimerasi, recettori ormonali e altri enzimi nucleari.

Metilazione del DNA

La metilazione del DNA è un importante meccanismo epigenetico che regola il silenziamento genico, l'imprinting, lo sviluppo embrionale e la stabilità dei cromosomi. La metilazione del DNA avviene sulla posizione a 5 carboni dei residui di citosina, principalmente all'interno dei dinucleotidi CpG, per formare 5-metilcitosine (5-mC). La reazione è catalizzata dalle DNA metiltransferasi (DNMT). I residui di 5-metilcitosina possono anche essere idrossilati dagli enzimi TET per formare 5-idrossimetilcitosina (5-hmC), che ha ruoli diversi dalla 5-mC. Forniamo strumenti robusti che consentono non solo di rilevare e quantificare 5-mC e 5-hmC, ma anche di distinguere accuratamente tra queste modifiche.

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Kits

La rilevazione quantitativa delle modificazioni degli istoni è importante per comprendere meglio la regolazione epigenetica dei processi cellulari nei tessuti normali o cancerosi. La tecnica più utilizzata per studiare come le modificazioni degli istoni e altre proteine che legano il DNA, come i fattori di trascrizione, influenzano l'espressione genica è chiamata immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) combinata con la reazione a catena della polimerasi qualitativa (qPCR). La ChIP prevede il reticolamento chimico delle proteine alle sequenze di DNA, seguito dall'immunoprecipitazione dei complessi reticolati mediante l'uso di anticorpi e microsfere per estrarre gli istoni modificati o altre proteine di interesse. Le modificazioni istoniche più comunemente studiate e meglio comprese sono l'acetilazione, la fosforilazione, la metilazione e l'ubiquitinazione. Le modificazioni istoniche regolano la trascrizione, la riparazione, la ricombinazione e la replicazione del DNA e possono alterare l'architettura locale della cromatina. Esplorate la nostra ampia gamma di kit per l'analisi di modelli complessi di modificazioni istoniche.

Controllo trascrizionale e post-trascrizionale: Regolazione dell'RNA

Tradizionalmente, la ricerca sull'espressione genica si è concentrata sulla regolazione trascrizionale attraverso le interazioni dei fattori di trascrizione con specifici siti di legame, le modifiche degli istoni all'interno della cromatina e le dinamiche cromatiniche coordinate associate ai cambiamenti nella trascrizione genica. Oggi la ricerca sull'espressione genica cerca di comprendere le dinamiche della regolazione dell'RNA, con l'obiettivo finale di colmare il divario tra il controllo trascrizionale e l'espressione delle proteine. Le proteine che legano l'RNA (RBP) svolgono un ruolo chiave nella regolazione post-trascrizionale dell'espressione genica.

RNA Regulation: Kit per l'immunoprecipitazione delle proteine che legano l'RNA (RIP)

La RIP può essere vista come l'analogo dell'applicazione ChIP, più nota, sull'RNA. La RIP può essere utilizzata per identificare specifiche molecole di RNA associate a specifiche proteine di legame nucleare o citoplasmatico. La RIP inizia con l'immunoprecipitazione di complessi endogeni di proteine leganti l'RNA e il co-isolamento di specie di RNA associate al complesso immunoprecipitato. Dopo la purificazione di queste specie di RNA, esse possono essere interrogate e identificate come mRNA o RNA non codificanti mediante una varietà di applicazioni, tra cui la RT-PCR quantitativa, l'analisi di microarray (RIP-Chip) e il sequenziamento ad alta velocità (RIP-Seq).