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Tampon de décapage pour Western blot à base de détergent

Le décapage et la nouvelle analyse d'un Western blot permettent de préserver les échantillons et d'effectuer rapidement des corrections ou des ajustements de la concentration en anticorps et de la durée d'incubation. Cette recette concerne une solution de décapage pour Western blot qui utilise le tensioactif dodécylsulfate de sodium (SDS) et l'agent réducteur β-mercaptoéthanol (BME) pour éliminer les anticorps et les réactifs de détection chimiluminescents ou fluorescents.

Ce calculateur permet de préparer avec précision cette solution de décapage pour Western blot à base de détergent, quel que soit le volume en millilitres. Saisissez le volume souhaité, cliquez sur le bouton « CALCULER » et le tableau s'affichera avec les quantités de chaque composant nécessaires.

Calculateur de recette de solution de décapage pour Western blot à base de détergent

100 mL Recipe Desired Volume: mL    
20 mL of 10% SDS (71736)   mL of 10% SDS
12.5 mL of 0.5 M Tris-HCl pH 6.8 (FW 157.60)    mL of 0.5 M Tris HCl pH 6.8
0.8 mL of β-mercaptoethanol (63689)   mL of β-mercaptoethanol
Adjust final volume to 100 mL with Milli-Q® Water Adjust final volume to   mL with Milli-Q® Water
  Procedure
 
  1. In a fume hood, place the blot in detergent stripping buffer and incubate with agitation for 30 minutes at 50 °C.
  2. Place the blot in 1X PBS and agitate for 10 minutes. Repeat with fresh buffer.
  3. Optional: Repeat the initial detection protocol (omitting the primary antibody step) to make sure that the antibodies have been inactivated or removed from the membrane.
  4. Place the blot in fresh 1X PBS and agitate for 10 minutes.
  5. Proceed to the blocking step for the next round of immunodetection.
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