我们的限制酶系列产品已经用五种独特的缓冲液进行了消化优化。当使用单一酶消化DNA时,请使用与酶一起提供的缓冲液。

用单一限制酶进行DNA消化的实验方案

  1. 按所示的顺序将各项组分加入到一支洁净的小管中:
    1 μL DNA(浓度1 μg/μL)
    2 μL10x缓冲液 1 μL限制酶 16 μL无菌水
  2. 在消化温度(通常37 °C)下孵育反应物1小时。
  3. 通过热灭活(65℃,15分钟)或加入10 mM终浓度的EDTA终止消化。
  4. 消化的DNA即可用于研究应用。

当一次使用两种限制酶时,首先使用限制酶缓冲液参考文件中的表格检查每种缓冲液中的酶活性。如果它们在同一缓冲液中都具有100%活性,则可以使用该缓冲液继续进行双重消化实验方案。或者,从常用双消化图表中确定最佳缓冲液。在某些情况下,由于缓冲液不相容(成分或温度),建议进行连续消化。

用两种限制酶进行DNA消化的实验方案

  1. 按所示的顺序将各项组分加入到一支洁净的小管中:
    1 μL DNA(浓度1 μg/μL)
    2 μL10x缓冲液 1 μL每种限制酶 15 μL无菌水
  2. 在消化温度(通常37 °C)下孵育反应物1小时。
  3. 通过热灭活(65℃,15分钟)或加入10 mM终浓度的EDTA终止消化。
  4. 消化的DNA即可用于研究应用。

连续DNA消化的实验方案

  1. 按所示的顺序将各项组分加入到一支洁净的小管中:
    1 μL DNA(浓度1 μg/μL)
    2 μL10x缓冲液 1 μL限制酶 16 μL无菌水
  2. 在消化温度(通常37 °C)下孵育反应物1小时。
  3. 通过热灭活(65℃,15分钟)或加入10 mM终浓度的EDTA终止消化。
  4. 使用纯化试剂盒回收DNA:重悬DNA,并将其稀释至1 μg/μL。
  5. 按照步骤1准备第二次消化。继续执行到步骤3。
  6. 消化的DNA即可用于研究应用。