3xFLAG®系统是原始系统的改进版本，融合了总共22个氨基酸的3个串联FLAG® 表位（图1）。含有3xFLAG®的融合蛋白的检测比任何其他系统提高多达200倍。像原始的FLAG标签一样，3xFLAG®是亲水的，含有肠激酶切割位点，并且尺寸相对较小。因此，蛋白质功能改变，阻断其他表位或降低溶解度的风险被最小化。对于表达水平较低的情况，3xFLAG®是理想的选择。我们的CMV载体特征为3xFLAG®融合蛋白提供了瞬时或稳定表达选择。
- 超灵敏系统 - 使用ANTI-FLAG®抗体检测< 10 飞摩尔样本（图2）；适用于哺乳动物细胞中低水平表达的案例。
- 卓越的检测 – 灵敏度比其他任何系统都高20-200倍（图3）。
- 多功能 - 增强免疫沉淀反应，免疫印迹和免疫细胞化学的检测。
- 检测和纯化产品的广泛选择 - ANTI-FLAG抗体，树脂和亲和捕获板。
图 1.3xFLAG® 序列。肠激酶可以去除N-末端 3xFLAG® 标签，肠激酶在Asp-Asp-Asp-Asp-Lys氨基酸序列标签的C-末端之后进行切割。
图 2.原始FLAG与3xFLAG®的免疫印迹检测。纯化的3xFLAG®-BAP（细菌碱性磷酸酶）和FLAG®-BAP转移到硝酸纤维素膜上的免疫印迹。用抗ANTI-FLAG® M2 单克隆抗体（一抗），抗小鼠HRP抗体（二抗）和ECL™化学底物进行检测。
图 3.3xFLAG®的相对灵敏度。每种蛋白质融合标签分别克隆在GST的C端。将纯化的蛋白质从1μg稀释至0.01ng并分析。通过免疫印迹分析使用推荐稀释度的各一抗和二抗小鼠IgG-HRP酶标结合物确定每个标签的检测极限。印迹用ECL显色。
瞬时表达载体
- N-端融合
- 细胞质表达
- PPT前导序列分泌
- 双标签配置
- 肠激酶去除3xFLAG®标签
- pMB1（pBR322的衍生物）是在细菌细胞中复制的启动区域
- β-内酰胺酶基因用于细菌中氨苄青霉素抗性筛选
图 4.MCS区域
稳定表达载体
- 用新霉素筛选（G 418硫酸盐）稳定表达
- N-或C-末端融合
- 双标签配置
- 细胞质表达或分泌
- 肠激酶去除N-末端3xFLAG®标签
- pMB1（pBR322的衍生物）是在细菌细胞中复制的启动区域
- β-内酰胺酶基因用于细菌中氨苄青霉素抗性筛选
图 5.稳定表达载体
BICEP™稳定表达载体
- 卓越的稳定表达
- Neor基因在EMCV IRES的控制下以不基于cap的方式翻译
- 稳定的细胞系生产，不用担心质粒损失
- 表达水平胜过竞争产品>30倍
- 经过多次传代后保持高表达水平
图 6.Bicep稳定表达载体
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