Oznaczanie kofeiny w kawie przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cienkowarstwowej
Czytaj więcej o
Wprowadzenie
Wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa (HPTLC) jest bardzo przydatną techniką analityczną i wymaga niewielkiego przygotowania próbki, co zostało zilustrowane na przykładzie analizy kofeiny w kawie. W przypadku próbek gotowanej kawy przed analizą konieczna jest jedynie ekstrakcja i filtracja przez filtr strzykawkowy PTFE 0,45 μm. Płytka HPTLC została wstępnie kondycjonowana fazą ruchomą, a skaner TLC został użyty do oznaczenia ilościowego po zakończeniu rozdziału chromatograficznego.
Wyniki i dyskusja
Kofeina została wykryta w świetle UV przy 254 nm, hRf = 56, (Rysunek 1). Skonstruowano czteropoziomową krzywą kalibracyjną i wykorzystano ją do celów ilościowych (rysunek 2). Każda próbka była analizowana w trzech powtórzeniach wykonywane równolegle, co jest zaletą chromatografii planarnej w porównaniu zarówno z GC, jak i HPLC.
.
| Ścieżka | Składnik | hRf | [Kofeina] (mg/ml) | Objętość aplikacji (µL) | [Kofeina] (mg/g) |
|---|---|---|---|---|---|
| 1, 2, 3, 4, 9, 10, 11, 12, 17, 18, 19, 20 | Standard kofeiny | 56 | 1.0 | 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 | - |
| 5, 13, 21 | Filter Coffee 1 | 56 | 1 | 27.5 | |
| 6, 14, 22 | Filter Coffee 2 | 56 | 1 | 15.2 | |
| 7, 15, 23 | Pad Coffee | 56 | 1 | 15.5 | |
| 8, 16, 24 | Chai Latte | 56 | 1 | 4.9 |
Rysunek 1.Rozwinięta płytka HPTLC przy 254 nm, dane chromatograficzne pokazane w tabeli powyżej.
Rysunek 2.Wykres kalibracji w trybie regresji wielomianowej (r = 0,9970).
| Chromatografia | |
|---|---|
| Płytka | HPTLC Silica gel 60 F254, 20x10cm |
| Przygotowanie próbki | Wzorzec kofeiny rozcieńczony w metanolu; Kawa gotowana z wodą i przefiltrowana przez filtr 0.45 μm. |
| Aplikacja próbki | ATS4 (Camag) |
| Objętość aplikacji | 0.1 do 2.0 μL |
| Faza kondycjonowania wstępnego i faza ruchoma | Acetonitryl / Metanol / n-Heptan 6/4/1 |
| Dystans kondycjonowania wstępnego odległość migracji | 7 cm 5 cm |
| Czas migracji | 9 min |
| Wykrywanie | |
|---|---|
| Długość fali | Światło UV o długości fali 254 nm i 366 nm |
| Staining | Brak |
| sprzętu do MS | ekspresji CMS (Advion) |
| Detekcja MS | Tryb ESI (+) (m/z 150 - 400) |
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim.