[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty ProduktyZastosowaniaUsługiZasobyWsparcie [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Klonowanie i ekspresja](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/genomics/cloning-and-expression)Przygotowanie komórek do elektroporacji # Przygotowanie komórek do elektroporacji Elektroporacja komórek to metoda wykorzystująca pole elektryczne do zwiększenia przepuszczalności błony komórkowej, dzięki czemu DNA lub inna substancja może zostać wprowadzona do komórki. ## Przygotowanie odczynników do elektroporacji komórek 2× pożywka YT:Rozpuścić 16 g tryptonu, 10 g ekstraktu drożdżowego i 5 g NaCl w 900 ml wody destylowanej. Dostosuj pH do 7,0 za pomocą NaOH. Dostosuj objętość do 1 l za pomocą wody destylowanej. Sterylizować w autoklawie przez 20 minut. Aby przygotować pożywkę stałą, dodaj 1,2% do 1,5% agaru. 1 mM HEPES:0,26 g HEPES, sól sodowa. Rozpuścić w 900 ml wody destylowanej. Dostosować pH do 7,0. Dostosować objętość do 1 l za pomocą wody destylowanej. Sterylizować w autoklawie. 10% glicerol w 1 mM HEPES,  pH 7.0:Aseptycznie dodać 10 mL sterylnego 100% glicerolu do 90 mL sterylnego 1 mM HEPES, pH 7.0. 10% glicerol w wodzie destylowanej:Dodaj 10 mL 100% glicerolu do 90 mL wody destylowanej.Sterylizować w autoklawie. Bufor izopropanolowy TE: 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA Fenol:Redestylowany fenol nasycony buforem TE zawierającym 8-hydroksychinolinę Chloroform/alkohol izoamylowy:Reagent-grade chloroform i alkohol izoamylowy, zmieszane 24:1 Fenol/chloroform:Równe części redestylowanego fenolu i chloroformu/alkoholu izoamylowego (24:1), każdy przygotowany jak opisano powyżej 3 M octan sodu, pH 5.4, roztwór wodny Etanol, 70%, 95% Tabela 1.Wymagane odczynniki ## Procedura 01. Zaszczepić 10 ml podłoża 2×YT szczepem gospodarza *E. coli* z płytki z podłożem LB lub 2×YT. Inkubować w temperaturze 37°C przez noc z wytrząsaniem. 02. Zaszczepić 1 l podłoża 2× YT 10 ml całonocnej hodowli komórek gospodarza. Inkubować przez 2 do 2,5 godziny w temperaturze 37 °C z wytrząsaniem przy 250 rpm, aż do osiągnięcia A600 od 0,5 do 0,7. 03. Umieścić kolbę na lodzie na 15 do 30 minut. 04. Wirować przy 4000 × g przez 20 minut w temperaturze 4 °C. 05. Zdekantować supernatant i ponownie zawiesić komórki w 1 l lodowato zimnego sterylnego 1 mM HEPES, pH 7,0. 06. Wirować jak opisano powyżej. Zdekantować supernatant i ponownie zawiesić komórki w 500 ml lodowatego sterylnego 1 mM HEPES o pH 7.0. 07. Wirować jak opisano powyżej. Zdekantować supernatant. Przepłukać komórki w 20 ml sterylnego 1 mM HEPES, pH 7,0, zawierającego 10% glicerolu. 08. Wirować jak opisano powyżej. Zdekantować supernatant. Zawiesić komórki w całkowitej objętości od 2 do 3 ml sterylnego 10% glicerolu w wodzie destylowanej. 09. Dozować w porcjach od 50 do 100 µL i przejść do protokołu elektroporacji lub zamrozić na suchym lodzie i przechowywać w temperaturze -70 °C. 10. Wyekstrahować ligowany wektor pGEX (jak również niecięty wektor) raz równą objętością fenolu/chloroformu i raz równą objętością chloroformu/alkoholu izoamylowego. 11. Usuń fazę wodną i dodaj 1/10 objętości 3 M octanu sodu, pH 5,4 i 2,5 objętości 95% etanolu. 12. Usunąć supernatant i przemyć osad 1 ml 70% etanolu. Wirować przez 5 minut, odrzucić supernatant i wysuszyć osad. 13. Zawiesić ponownie każdy osad DNA w 20 µl sterylnej wody destylowanej. Alternatywnie, DNA można oczyścić za pomocą żelu. #### Uwaga: DNA musi być całkowicie wolne od soli przed elektroporacją. ## Wydajność elektroporacji Zaleca się, aby jeden nanogram nieciętego (superzwiniętego) wektorowego DNA był transformowany równolegle z ligacjami insert/pGEX w celu określenia wydajności każdego preparatu komórek kompetentnych. Więcej informacji na temat protokołów elektroporacji można znaleźć w instrukcji wybranego systemu elektroporacji. ## Materiały Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd Response not successful: Received status code 500 __Powiązane artykuły__ - [Wprowadzenie do transfekcji komórek](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/transfection-reagents) - [Wektory ekspresyjne systemu 3xFLAG® dla Ultra-Sens](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/3x-flag) - [Niebiesko-białe badania przesiewowe i protokoły selekcji kolonii](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/blue-white-screening) - [Protokoły transformacji bakterii](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/competent-cells) - [Endonukleazy restrykcyjne - nożyczki molekularne](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/restriction-endonucleases-the-molecular-scissors) - [Klonowanie interesujących genów do wektora plazmidowego](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/restriction-enzyme-cloning-manual-cloning) - [Transformacja bakterii E. coli za pomocą zmodyfikowanego plazmidu](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/restriction-enzyme-cloning-manual-transformation) - [System promotora T7](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/t7-promoter-system) - [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. Wsparcie[Obsługa klienta](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/support/customer-support)[Kontakt](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/offices)[FAQ](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/)[Karty charakterystyki (SDS)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/documents-search?tab=sds)[Certyfikaty (COA/COO)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/documents-search?tab=coa)[Jakość i przepisy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/quality-and-regulatory-management)[Kalkulatory i aplikacje](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/support/calculators-and-apps)[Webinaria](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/webinars) Zamówienia[Wyszukiwanie zamówień](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup)[Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order)[Produkty niestandardowe](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/services/custom-products)[Rozwiązania eCommerce](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/ecommerce/ecommerce-solutions) Firma[O nas](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/about-us)[Odpowiedzialność](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/ssbi)[Wydarzenia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/events)[Komunikaty prasowe](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/press)[Programy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/partnership-programs)[Kariera](https://careers.merckgroup.com/global/en)[Biura](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/offices) Media społecznościowe [](https://www.linkedin.com/company/merck-life-science) [](https://x.com/Merck_lifesci) [](https://www.facebook.com/Merck.lifescience) [](https://www.instagram.com/mercklifescience/) [](https://www.youtube.com/@MerckLifeScience/featured) Merck __Badania. Rozwój. Produkcja.__ Jesteśmy wiodącym dostawcą dla globalnej branży Life Science, oferującym rozwiązania i usługi w zakresie badań, rozwoju i produkcji biotechnologicznej oraz rozwoju i produkcji leków farmaceutycznych. [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) [Rozwiązania Sigma-Aldrich®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/sigma-aldrich)[Rozwiązania BioReliance®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/bioreliance)[Roztwory Millipore®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/millipore)[Rozwiązania SAFC®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/safc)[Rozwiązania Milli-Q®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/milliq)[Rozwiązania Supelco®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/supelco) © 2026 Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy i/lub jej podmioty stowarzyszone. Wszelkie prawa zastrzeżone, w tym eksploracja tekstu i danych na potrzeby szkolenia w zakresie sztucznej inteligencji i podobnych technologii. Powielanie jakichkolwiek materiałów ze strony jest surowo zabronione bez zezwolenia. [Warunki korzystania z witryny](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/site-use-terms)|[Polityka prywatności](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/privacy-statement)|[Ogólne warunki sprzedaży](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/terms-and-conditions)|[Zgoda na prawa autorskie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/copyright-consent)|[Mapa witryny](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/site-map) An unknown error has occured.