蛋白質標籤與修飾

步驟 1:標籤。將蛋白質溶解於緩衝液中。加入染料攪拌 2 小時。

步驟 2:淨化。平衡色譜柱。加入反應混合物,開始分離。收集純化的標示蛋白溶液。
蛋白質由多肽鏈組成,其生物功能部分取決於正確的折疊、大小以及存在於整個多肽鏈中的反應性功能基團的數量。提供特定位點的蛋白質修飾能力為研究人員提供了研究各種特性及其整體生物功能的能力。蛋白質標籤和修飾技術包括加入螢光團、生物素和其他小分子來檢驗蛋白質與蛋白質之間的互動、蛋白質折疊、研究整體蛋白質結構,以及它們的生物功能。
特色類別
熒光蛋白標籤
綠色熒光蛋白 (GFP) 的發現和廣泛加入是這項技術的有力例證。GFP 及其對應分子對許多研究領域以及我們對生物過程的了解都有極大的影響。舉例來說,將螢光標籤整合到抗體上,可以偵測和定量組織中高度特異性的蛋白複合物,或將抗體蛋白複合物定向固定,用於 ELISA 和 Western 印跡應用。然而,使用 GFP 的一個顯著缺點是,蛋白質的功能可能會因為加入這種大小的額外蛋白質標籤而被破壞。為了迴避這個挑戰,研究人員可能會使用比 GFP 更小的螢光標籤、生物素,或是加入含有生物互交功能的非天然胺基酸。
酵素-蛋白質結合
加入獨特的酵素或探針是研究人員用來標示蛋白質的另一種方法。常用的酵素蛋白結合物包括鹼性磷酸酶 (AP) 和辣根過氧化酶 (HRP)。使用酵素-蛋白標記技術有許多優點,因為它們可以放大訊號、提供多樣化的訊號輸出,而且每種酵素都有許多底物可供使用。常見的信號輸出包括螢光、化學發光或比色檢測。這些多樣化的訊號輸出使它們適用於細胞和組織中以免疫組織化學 (IHC) 或免疫螢光 (IF) 為基礎的檢測應用。
新興的蛋白質標籤技術
在疾病研究和藥物發現領域中,研究人員正在熱烈研究靶向蛋白質降解技術,以找出新的藥物靶點和潛在的治療方法。蛋白質分解-靶向嵌合體技術利用雙功能分子,這些分子的一端被設計成與目標疾病蛋白質結合,而另一端則與 E3 結合酶結合,從細胞中消除蛋白質。這些分子對各種疾病靶點的結合特異性,以及利用細胞內部蛋白降解系統進行蛋白降解的靶向能力,使其成為疾病研究的強大蛋白標記技術。
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