Trang chủ Nhân bản & biểu hiệnGiới thiệu về biến đổi men

Giới thiệu về biến đổi men

Lịch sử biến đổi & biến đổi trong nấm men

Nấm men là hệ thống mô hình nhân chuẩn cho các nghiên cứu vì chúng thể hiện sự phát triển nhanh và có các tế bào phân tán. Chúng có một hệ thống di truyền được xác định rõ ràng và một hệ thống biến đổi DNA rất linh hoạt có thể được sử dụng hiệu quả để sản xuất protein.

Biến đổi là quá trình DNA ngoại sinh được đưa vào một tế bào, dẫn đến sự thay đổi có thể thừa kế hoặc biến đổi di truyền. Điều này lần đầu tiên được báo cáo ở bệnh viêm phổi Streptococcus bởi Griffith vào năm 1928.¹ Nguyên lý biến đổi DNA đã được chứng minh bởi Avery et al. năm 1944.^{Năm 2} Trong trường hợp nấm, các phi lê của nấm men mọc chồi Saccharomyces cerevisia lần đầu tiên được biến đổi thành công vào năm 1978.³

Trong trường hợp của nấm, các quả cầu của nấm men nở Saccharomyces cerevisia lần đầu tiên được biến đổi thành công vào năm 1978.³ Hầu hết các loài nấm men, bao gồm Saccharomyces cerevisiae, có thể bị biến đổi bởi DNA ngoại sinh trong môi trường.⁴ tế bào nấm men được xử lý bằng enzyme để làm suy giảm thành tế bào của chúng, tạo ra các spheroin. Những tế bào này rất mỏng manh nhưng lấy DNA ngoại lai với tốc độ cao.⁵ công nghệ DNA tái tổ hợp trong nấm men đã tự thiết lập, và vô số các cấu trúc vector khác nhau có sẵn.

Transformation in a Cell

Hình 1.Sơ đồ đại diện cho sự biến đổi trong nấm men

Một số phương pháp biến đổi trong tế bào nấm men (Hình 1) đã được phát triển.^{4, 5} Một số phương pháp phổ biến được sử dụng trong chuyển đổi tế bào nấm men là các phương pháp liti, điện phân, sinh học và hạt thủy tinh. Những phương pháp này thường được sử dụng cho S. cerevisia ebut có thể được sử dụng để biến đổi các loại nấm khác như nấm men (ví dụ, Schizosaccharomycespombe, Candida albican sand Pichiapastoris) và nấm sợi (ví dụ, Aspergillu sspecies).

Yêu cầu

Phương pháp chuyển đổi bao gồm ba bước chính:

Chuẩn bị các tế bào nấm men có khả năng
Biến đổi với DNA plasmid
Mạ tiếp theo để chọn các biến đổi.

Vật liệu Revie cần thiết và sự biến đổi nguyên tắc chi tiết.

Ứng dụng

Biến đổi được sử dụng rộng rãi trong sinh học phân tử. Một số ứng dụng phổ biến của biến đổi men như sau:

Các chất biến đổi men có thể được sử dụng thêm cho mục đích ly giải tế bào và chuẩn bị plasmid.
DNA plasmid thu được từ các chất biến đổi sau đó có thể được sử dụng làm mẫu PCR hoặc để biến đổi E. coli.
Các chất biến đổi nấm men được sử dụng trong các hệ thống lai của nấm men để nghiên cứu các tương tác protein-protein hoặc protein-DNA.
Các kỹ thuật biến đổi men cũng có thể được sử dụng để sản xuất thương mại protein và enzyme.
Chúng cũng được sử dụng trong công nghiệp thực phẩm và hệ thống xử lý chất thải thực vật.
Các hệ thống biểu hiện men được thiết kế để tổng hợp và tiết ra các protein ở người (như interleukin-1β) có thể có tiềm năng điều trị to lớn trong ngành dược phẩm.

Tính toán hiệu quả chuyển đổi

Các loài nấm men khác nhau có hiệu quả khác nhau.⁶ Hiệu suất biến đổi được định nghĩa là số lượng chất biến đổi được tạo ra trên mỗi µg của DNA plasmid siêu cuộn được sử dụng trong phản ứng biến đổi.⁷ Hầu hết các giao thức biến đổi đã được phát triển cho men nướng, S. cerevisia eand có thể không lý tưởng cho các loài khác.

Công thức hiệu quả chuyển đổi:
Số lượng khuẩn lạc trên mảng	×1000 ng/µg
Lượng mạ DNA (ng)	×1000 ng/µg

Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả

Một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả của sự biến đổi men như sau:

Kích thước DNA
Plasmid
Các dạng DNA
Cell genotype
Cell growth
Type of transformation

Vật liệu

Rất tiếc, đã xảy ra lỗi ngoài dự kiến

Response not successful: Received status code 500

Tài liệu tham khảo

Hinnen A, Hicks JB, Fink GR. 1978. Transformation of yeast.. Proceedings of the National Academy of Sciences. 75(4):1929-1933. https://doi.org/10.1073/pnas.75.4.1929

Griffith F. 1928. The Significance of Pneumococcal Types. J. Hyg.. 27(2):113-159. https://doi.org/10.1017/s0022172400031879

Avery OT, MacLeod CM, McCarty M. 1995. Studies on the Chemical Nature of the Substance Inducing Transformation of Pneumococcal Types. Mol Med. 1(4):344-365. https://doi.org/10.1007/bf03401572

Ito H, Fukuda Y, Murata K, Kimura A. 1983. Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations.. 153(1):163-168. https://doi.org/10.1128/jb.153.1.163-168.1983

Johnston S, Anziano P, Shark K, Sanford J, Butow R. 1988. Mitochondrial transformation in yeast by bombardment with microprojectiles. Science. 240(4858):1538-1541. https://doi.org/10.1126/science.2836954

Dohmen RJ, Strasser AWM, Höner CB, Hollenberg CP. 1991. An efficient transformation procedure enabling long-term storage of competent cells of various yeast genera. Yeast. 7(7):691-692. https://doi.org/10.1002/yea.320070704

HAYAMA Y, FUKUDA Y, KAWAI S, HASHIMOTO W, MURATA K. 2002. Extremely Simple, Rapid, and Highly Efficient Transformation Method for the Yeast Saccharomyces cerevisiae Using Glutathione and Early Log Phase Cells. J. BIOSCI. BIOENG.. 94(2):166-171. https://doi.org/10.1263/jbb.94.166

Đăng nhập để tiếp tục

Để tiếp tục tìm hiểu, vui lòng đăng nhập hoặc tạo tài khoản.

Không có tài khoản?

Để mang đến sự thuận tiện cho khách hàng, trang này đã được dịch bằng máy. Chúng tôi đã nỗ lực để đảm bảo việc dịch máy này cho ra bản dịch chính xác. Tuy nhiên, chất lượng dịch máy không được hoàn hảo. Nếu bạn không hài lòng với nội dung dịch bằng máy, vui lòng tham khảo phiên bản tiếng Anh.