T7 Promoter System

• What Is the T7 Promoter Sequence?
• T7 Tính năng của hệ thống biểu hiện plasmid
• Công nghệ Thẻ MAT™
• T7 Hướng dẫn hệ thống Promoter and Expression

  

Promoter T7 là một chuỗi các cặp base DNA dài tới vị trí bắt đầu phiên mã tại +1 (5 - TAATACTCACTATAG - 3) được công nhận bởi 18 T7 RNA polymerase¹ . Promoter T7 thường được sử dụng để điều chỉnh biểu hiện gen của protein tái tổ hợp, sau đó có thể được sử dụng cho nhiều ứng dụng nghiên cứu hạ lưu².

 T7 Tính năng của hệ thống biểu hiện plasmid

Các vectơ dựa trên promoter vi khuẩn T7 cho phép biểu hiện, phát hiện và tinh chế hỗn hợp FAG tái tổ hợp trong E. coli. Một số vectơ chứa promoter T7 cung cấp các tùy chọn thẻ kép cho protein tổng hợp gắn CỜ và MAT™. Những vectơ này tạo ra kháng ampicillin để dễ dàng lựa chọn các chất biến đổi dương tính. Ngoài ra, các vectơ chứa bộ kết thúc phiên mã T1T2, nguồn gốc pMB1 (dẫn xuất của pBR322) của sao chép, nguồn gốc f1 và gen lacI để ức chế promoter T7.

 Các vectơ pT7 LÁ CỜ ® và pT7 MAT™ cung cấp bộ quảng bá T7/lac rất mạnh. Những vectơ biểu hiện này tạo ra năng suất cao hơn của protein tái tổ hợp so với hệ thống promoter tac. Tuy nhiên, promoter T7 được biết đến với biểu hiện nền ("rò rỉ"), có thể là một hạn chế khi các protein tái tổ hợp độc hại với tế bào chủ. Do đó, các vectơ của chúng ta chứa các chuỗi vận hành lac (lacO) ngay lập tức xuôi dòng từ promoter để giảm biểu hiện rò rỉ. Không giống như hệ thống promoter tac, pT7 vectơ phải được biểu diễn trong các vật chủ chứa một nguồn T7 polymerase như (DE3) các chủng lysogenic.

 Công nghệ Thẻ MAT™

Thẻ MAT™ hoặc Thẻ có ái lực kim loại (HNHNHRHKH) đã được tạo ra để tinh chế các protein tổng hợp MAT™ tái tổ hợp bằng gel niken và Cobalt. Các sản phẩm HIS-Select cho phép tinh chế chọn lọc cao các protein tổng hợp gắn thẻ histidine như fusion MAT™. Nhiều vector mới nhất của chúng tôi sử dụng thẻ MAT™, thường kết hợp với thẻ FLAT ® nổi tiếng. Thẻ MAT™ chứa vectơ được cung cấp trong các định dạng để gắn thẻ N-terminal hoặc C-terminal.

T7 Sản phẩm hướng dẫn hệ thống xúc tiến và biểu hiện

Rất tiếc, đã xảy ra lỗi ngoài dự kiến

Response not successful: Received status code 500

Hình 1. Gen kanamycin và gen ampicillin để chọn lọc linh hoạt hơn ở E. coli

Tài liệu tham khảo

1. Rong M, He B, McAllister WT, Durbin RK. 1998. Promoter specificity determinants of T7 RNA polymerase. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95(2):515-519. https://doi.org/10.1073/pnas.95.2.515

2. Komura R, Aoki W, Motone K, Satomura A, Ueda M. High-throughput evaluation of T7 promoter variants using biased randomization and DNA barcoding. PLoS ONE. 13(5):e0196905. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0196905