COLLD-RO

Colagenase D

from Clostridium histolyticum

• UNSPSC Code: 12352204
• Número CE: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Biological source: Clostridium histolyticum
• Concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)

Propriedades

• biological source: Clostridium histolyticum
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• collagenase activity: >0.15 U/mg lyophilizate
• packaging: pkg of 100 mg (11088858001), pkg of 2.5 g (11088882001), pkg of 500 mg (11088866001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)
• technique(s): tissue processing: suitable
• color: light brown
• optimum pH: 6.0-8.0
• solubility: water: soluble
• NCBI accession no.: WP_171012037
• application(s): cell analysis
• foreign activity: Clostripain 0.060 U/mg, Trypsin <0.2 U/mg (with BAEE), Proteases ≤60 U/mg ( Azocoll)
• storage temp.: 2-8°C

Descrição

General description

A colagenase D é preparada a partir de culturas de Clostridium histolyticum por filtração, precipitação de sulfato de amônio, diálise e liofilização.

Application

A colagenase de C. histolyticum é amplamente usada para desagregação de vários tipos de tecidos (p. ex.,, pulmão, coração, músculos, ossos, tecido adiposo, fígado, rins, cartilagem. glândulas mamárias, placenta, vasos sanguíneos, cérebro, tumores) e para o preparo de suspensões de célula única para o estabelecimento de sistemas de cultura celular primária. A colagenase D é recomendada quando a funcionalidade e a integridade das proteínas de superfície celular são importantes.
A colagenase de Clostridium da Roche foi usada para preparar células de vários tipos de tecido, como hepatócitos, adipócitos, ilhotas pancreáticos, células epiteliais, células musculares, células endoteliais, etc. Contudo, a adequação de cada lote da enzima para perturbação de um tecido específico deve ser determinada empiricamente.

Biochem/physiol Actions

A colagenase degrada o colágeno nativo. Clostripain, enzimas como a tripsina e proteases neutras também degradam outras proteínas.

Features and Benefits

Conteúdo
Liofilizado, não estéril

Physical form

Liofilizado, não estéril.

Preparation Note

Ativador: Ca²⁺
Concentração de trabalho: 0,5-2,5 mg/ml
Condições de armazenamento (solução de trabalho): -15 ºC a -25 °C
A Roche recomenda reconstituir apenas a quantidade de liofilizado necessária para uso imediato. A solução reconstituída pode ser armazenada a -15 ºC a -25 °C por até uma semana. Evite o congelamento e descongelamento repetido, uma vez que a atividade diminui após cada reconstituição.

Inibidores:
Inibidores de colagenase: EDTA, EGTA, Cis, His, DTT, 2-mercaptoetanol
A colagenase não é inibida pelo soro.
Inibidores de clostripain: TLCK
Inibidores da tripsina: aprotinina, inibidor da tripsina (clara de ovos, soja)

Atividade enzimática:
Atividade da colagenase: >0,15 U/mg (segundo Wünsch) (+25 °C, 4-fenil-azobenzil-oxicarbonil-Pro-Leu-Gli-Pro-D-Arg como o substrato)
Atividades enzimáticas contaminantes: tripsina, clostripain e atividade proteolítica total
A colagenase D tem uma atividade de colagenase de normal a alta e atividade tríptica muito baixa) (em geral <0,2 unidades/mg, BAEE como substrato).

Armazenar ao abrigo da luz.

Reconstituição em solução salina balanceada (p. ex., HBSS)

Other Notes

A colagenase da Roche é medida em unidades Wünsch (1 μmol de produto formado por minuto a +25 °C com substrato Wünsch).
Frequentemente, as atividades da colagenase são representadas em unidades de Mandl (1 μmol de leucina liberada do colágeno em 5 horas a +37 ºC).
Infelizmente, não existe um fator de consistente entre as duas unidades de atividade, uma vez que a unidade de Mandl depende, em parte, da concentração de proteases contaminantes no preparo da colagenase, uma variável indefinível. Um preparado de colagenase mais puro resultaria, na verdade, em uma atividade específica menor em unidades de Mandl do que o preparado bruto. Preparados de Clostridium tipicamente geram fatores de conversão de cerca de 1:1800 (p. ex., um determinado lote de colagenase de Clostridium continha cerca de 0,15 Wünsch U/mg e 250 Mandl U/mg).

Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS07,GHS08
• Palavra de aviso: Danger
• Códigos de risco: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Ponto de inflamação (°F): does not flash
• Ponto de inflamação (°C): does not flash