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KAPA2G Robust HotStart ReadyMix

2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)

• Synonym(e): Hot-Start-PCR, PCR
• NACRES: NA.55
• UNSPSC Code: 41106300

Eigenschaften

• usage: sufficient for 100 reactions, sufficient for 500 reactions
• shelf life: ≤12 mo.
• feature: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR, dNTPs included, hotstart
• packaging: pkg of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5701), pkg of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5702)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: 2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)
• technique(s): PCR: suitable, whole genome amplification: suitable
• input: crude DNA
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Die KAPA2G Robust DNA-Polymerase der zweiten Generation wurde weiterentwickelt, um die uneinheitliche Amplifikation über ein großes Spektrum an Amplikontypen (GC- und AT-reich) zu beheben. KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ ermöglicht eine höhere Prozessivität und spezifische Aktivität, was zu einer robusteren PCR-Leistung, höherer Sensitivität und verbesserter Toleranz gegenüber gängigen Inhibitoren führt. Die hohe Leistung von KAPA2G Robust DNA-Polymerase eignet sich ideal für schwierige PCR-Anwendungen und Proben. Dadurch wird die Erfordernis zur Optimierung mit mehreren Enzymen und Protokollen eliminiert.

Application

• Amplifikation von GC- oder AT-reichen Matrizen
• Matrizen, die gängige PCR-Inhibitoren enthalten, z. B. Salze, Harnstoff, SDS oder Ethanol
• PCR von unverarbeiteten Proben, z. B. Speichelproben, kultivierte Säugetier-, Hefe- oder Bakterienzellen
• Kolonie-PCR
• DNA-Extraktion und -amplifikation
• Mutationsscreening

Biochem/physiol Actions

Mit KAPA2G Robust HotStart^® DNA-Polymerase erzeugte DNA-Fragmente haben die gleichen Eigenschaften wie DNA-Fragmente, die mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase erzeugt werden. Sie können für routinemäßige Downstream-Analysen oder -Anwendungen, einschließlich Restriktionsenzymverdau, Klonierung und Sequenzierung verwendet werden. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Robust HotStart eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität auf, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität. Die Genauigkeit von KAPA2G Robust HotStart ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 105 einbezogenen Nukleotiden. Mit KAPA2G Robust HotStart erzeugte PCR-Produkte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren geklont werden.

Features and Benefits

Wirksame Amplifikation von GC- und AT-reichen Zielen

• Robuste Leistung über einen großen Bereich an GC- und AT-reichen Matrizen
• Höhere PCR-Erfolgsraten

Verbesserte Toleranz gegenüber gängigen PCR-Inhibitoren

• Wirksame Amplifikation von unverarbeiteten Proben
• Höhere Ausbeute und Sensitivität je Einheit Enzym

Unübertroffene Leistung bei Kolonie-PCR

• Höhere Ausbeute und verbesserte Konsistenz von PCR direkt aus E. coli und Hefezellen

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix PRC Kits enthalten KAPA2G Robust DNA-Polymerase, die für eine hohe Prozessivität und Inhibitortoleranz entwickelt wurde.
• Sowohl aufgereinigte genomische DNA als auch unverarbeitete Proben (z. B. Kolonie-PCR) können als Matrix verwendet werden.
• Verwenden Sie 15 Sek./kb Extensionszeit je Zyklus und erhöhen Sie diese bei schwierigen Amplikonen oder Matrizen auf 30 bis 60 Sek./kb.
• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix enthält 2 mM MgCl₂ bei 1X.
• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix mit Farbstoff enthält zwei inerte Tracking-Farbstoffe, um die direkte Einschleusung in Agarose-Gele zu ermöglichen.
• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix eignet sich ideal für Einzelprotokoll-PCR, d. h. die Amplifikation von Fragmenten variiert von 25 bis 65 % GC bis zu 1 kb lang, Verwendung eines einzelnen Reaktionsaufbau- und Durchlaufprotokolls.
• Die Reaktionsprodukte sind 3′-dA-angebunden und können zu TA-Klonierungsvektoren kloniert werden.

Preparation Note

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert werden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur gehalten wird. Die Langzeitlagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Bitte beachten Sie, dass Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, anfälliger für den Abbau sind, wenn sie während der Verwendung kontaminiert sind, weswegen eine Lagerung bei solchen Temperaturen auf Risiko des Anwenders erfolgt.

Analysis Note

Jede Charge KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase enthält nachgewiesen <2 % verunreinigendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Robust HotStart ReadyMix PCR-Kits werden strengen Qualitätskontrollen unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf das Maß an DNA-Kontamination.

Other Notes

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Legal Information

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Robust HotStart^® DNA Polymerase 1U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 2mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07,GHS08
• Signalwort: Warning
• Gefahrencodes: H302,H371
• Sicherheitshinweise: P260 - P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P308 + P311 - P501
• Hazard Classifications: Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2
• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• Was ist los?: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash