API-RO

Alkalische Phosphatase (AP)

grade I, from calf intestine

• Synonym(e): AP, Alkalische Phosphatase
• UNSPSC Code: 12352204
• EG-Nummer: 3.1.3.1 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• eCl@ss: 32160703
• Biological source: bovine (calf) intestine

Eigenschaften

• biological source: bovine (calf) intestine
• form: suspension
• packaging: pkg of 1,500 U (10108138001), pkg of 7,500 U (10108146001)
• manufacturer/tradename: Roche
• technique(s): protein detection: suitable
• optimum pH: 8.0-10.5
• absorption: 7.6 at 278 nm (10 mg AP/ml)
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Ortho-Phosphor-Monoester-Phosphohydrolase (Optimum im alkalischen Bereich)
Die alkalische Phosphatase katalysiert die Entfernung von Phosphatgruppen aus verschiedenen phosphorylierten Verbindungen. Sie hydrolysiert 5′-Monophosphatgruppen sowohl bei DNA als auch bei RNA. Sie kann auch 5′-Diphosphat- und 5′-Triphosphatgruppen von RNA hydrolysieren.

Bei 37 °C mit 4-Nitrophenylphosphat als Substrat und Diethanolamin als Puffer (400 U/mg bei 25 °C mit 4-Nitrophenylphosphat als Substrat und Glycin als Puffer)

Application

Selektive Abspaltung der terminalen Phosphatgruppen von Oligonukleotiden und beim Austausch und der Freisetzung von Nukleotiden bei Proteinen. Es diente außerdem zur Phosphorylierung von Proben zur Unterscheidung zwischen Phosphatgruppen, die als phosphorylierte Glykane oder als phosphorylierte Aminosäurereste vorliegen.

Biochem/physiol Actions

Hitzeinaktivierung: Die AP-Aktivität wird durch Inkubation des Enzyms bei 65 °C irreversibel zerstört.
Die Denaturierung hängt von der Proteinkonzentration ab – bei weniger als 10 U/ml (0,1 mol/l Glycinpuffer, pH 10,5, 1 mmol/l MgCl₂ und 0,1 mmol/l ZnCl₂) wird die AP durch eine Inkubation von 10 min bei 65 °C inaktiviert.

Physical form

Suspension in 3,2 M Ammoniumsulfatlösung, 1 mM MgCl₂, 0.1 mM ZnCl₂, pH-Wert ca. 7

Preparation Note

• Aktivator: Zweiwertige Metallionen (Mg²⁺, Co²⁺, Mn²⁺)
• Aminoalkohole (2-Amino-2-methyl-1-propanol, Diethanolamin)

Beachten Sie bitte, dass hohe Konzentrationen an Aminoalkoholen auch als kompetitive Inhibitoren wirken können (z. B. Monoethanolamin in Diethanolamin).

Lagerbedingungen (Arbeitslösung): Die Suspension wird mit einer Konzentration von c = ca. 5 mg/ml geliefert.
Wenn diese Suspension nur 5- bis 10-fach mit zusätzlicher 3,2 M Ammoniumsulfatlösung, 1 mM MgCl₂, 0.1 mM ZnCl₂, pH-Wert ca. 7, verdünnt wird, erwarten wir aufgrund der allgemeinen Erfahrung, dass die Suspension mehrere Wochen haltbar ist, wenn sie bei 4 °C gelagert wird (ohne Gewähr!).

Analysis Note

Verunreinigungen: <0,0004 % PDE, <jeweils 0,004 % ADA und A-5-MP-Desaminase

Other Notes

AP ist ein Dimer aus identischen oder nahezu identischen Untereinheiten. Jede Untereinheit enthält zwei Zn²⁺-Moleküle: ein fest gebundenes, das für die strukturelle Stabilität notwendig ist, und ein lose gebundenes, das für die katalytische Aktivität benötigt wird. Das aktive Zentrum enthält ein reaktives Serin.
Bei manchen Säugetieren (z. B. beim Menschen) gibt es mindestens 3 unterscheidbare Isoenzyme: eine Form im Darm, eine in der Plazenta und eine in Knochen/Leber/Niere.

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Umrechnung der Einheiten: 1 Roche-Einheit (getestet bei +25 °C) entspricht ~ 2 bis 2,5 Sigma-Einheiten (getestet bei +37 °C).
Die AP-Aktivität wird nicht in Armstrong-Einheiten ausgedrückt; ein Umrechnungsfaktor für internationale Einheiten ist nicht bekannt.
Ca. 3,8 U (AP Qualitätsgrad I) oder 4,0 U (AP Qualitätsgrad II) [+37 °C, 4-NPP als Substrat, Diethanolamin als Puffer, pH 9,8] = 1 U [+25 °C, 4-NPP als Substrat, Glycin als Puffer, pH 10,5].

Biochemika-Information. 87 (AP Qualitätsgrad I):
1,0 U [+37 °C, QC-Testbedingungen] = 0,79 U [+30 °C, QC-Testbedingungen] = 0.57 U [+25 °C, QC-Testbedingungen]

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash