Průvodce výběrem síťovacích prostředků
Hledáte dokonalý síťovač pro svůj výzkum biokonjugace? Projděte si našeho podrobného průvodce výběrem, který je přehledně uspořádán podle typu crosslinkeru, reaktivních skupin, délky ramene spaceru a dalších parametrů, které vám pomohou při správném výběru.
Přehled sekcí
Zesíťovač přemění interagující proteiny na zesíťované proteiny prostřednictvím biokonjugace.
Co jsou to síťové-linky
Síťové-linky jsou v chemické biologii a biokonjugaci základní chemické sloučeniny, které spojují dvě nebo více molekul vytvářením kovalentních vazeb. Tyto linkery mají klíčový význam v mnoha aplikacích, včetně vytváření biokonjugátů, zkoumání interakcí mezi proteiny a proteiny a vývoje biomateriálů. Crosslinkery se vyrábějí v různých typech, z nichž každý má specifické funkce přizpůsobené různým aplikacím.
Referenční tabulka pro výběr crosslinkerů
Křížový odkaz | Reaktivní skupiny | Délka ramene rozdělovače | Rozpustnost ve vodě | Koleabilita | Účinnost síťování | Stabilita | Toxicita/Biokompatibilita |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
Ester NHS (amin) | 11.4 Å (tuhý) | Nízký | Nezávažná | Vysoká | Stabilní, citlivá na vlhkost | Středně toxický | |
NHS ester (amin), maleimid (thiol) | 11.6 Å (tuhý) | Vysoký | Nezávažný | Vysoký | Stabilní za fyziologických podmínek, citlivá na světlo | Nízká toxicita, vhodné in vivo | |
Karbodiimid (karboxyl/amin) | Nulová délka | Vysoký | Rozložitelný v kyselých podmínkách | Vysoký | Stabilní v kyselých podmínkách | Nízká toxicita, vhodné in vivo | |
NHS ester (amin) | 11.4 Å (tuhý) | Vysoký | Nespojitý | Vysoký | Stabilní, citlivá na vlhkost | Středně toxický | |
NHS ester (amin), disulfid (thiol) | 12.0 Å (tuhý) | Vysoký | Rozložitelný za redukčních podmínek | Vysoký | Stabilní, redukční činidla se štěpí | Nízká toxicita, vhodné in vivo | |
NHS ester (amin) | 22.4 Å (flexibilní) | Vysoký | Nezávažný | Vysoký | Stabilní, citlivý na vlhkost | Nízká toxicita | |
Maleimid (thiol) | 16.1 Å (flexibilní) | Nízký | Nezávažná | Vysoká | Stabilní, citlivé na světlo | Středně toxický | |
Ester NHS (amin) | 9.2 Å (tuhý) | Nízký | Neskliditelný | Střední /p> | Stabilní | Středně toxický | |
NHS ester (amin), maleimid (thiol) | 10.2 Å (tuhý) | Nízký | Nezávitová | Vysoká | Stabilní za fyziologických podmínek, citlivá na světlo | Středně toxický | |
NHS ester (amin) | Variabilní (závisí na délce PEG) | Vysoká | Štěpné a neštěpné varianty | Vysoká | Stabilní, přizpůsobitelné na základě délky PEG | Nízká toxicita, vhodné in vivo |
Poznámky:
- DSS (disuccinimidylsuberát) je oblíbený homo-bifunkční síťovač s vysokou reaktivitou, ale mírnou toxicitou.
- Sulfo-SMCC je široce používaný hetero-bifunkční síťovač s vysokou rozpustností a nízkou toxicitou, vhodný pro aplikace in vivo.
- EDC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid) je síťovač s nulovou délkou známý svou vysokou účinností a nízkou toxicitou.
- BS3 (bis[sulfosukcinimidyl] suberát) je podobný DSS, ale s vyšší rozpustností ve vodě.
- DTSSP (3,3'-Dithiobis[sulfosukcinimidylpropionát]) nabízí štěpitelnost za redukčních podmínek.
- Sulfo-NHS-LC-Biotin se používá pro biotinylaci s flexibilním spacerovým ramenem.
- BMH (Bismaleimidohexan) poskytuje flexibilitu s maleimidovými skupinami pro thiolovou reaktivitu.
- DMP (Dimethyl pimelimidate) se používá méně často, ale je účinný pro specifické aplikace.
- MBS (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysukcinimid ester) je další hetero-bifunkční možností se specifickými aplikacemi.
- Pegylované crosslinkery nabízejí přizpůsobitelné délky spacerů a jsou vysoce biokompatibilní.
Jak fungují síťovače?
Síťovače fungují tak, že reagují se specifickými funkčními skupinami na molekulách. Aminoreaktivní skupiny, jako jsou estery NHS a izokyanáty, reagují s primárními aminy na proteinech nebo jiných biomolekulách. Sulfhydrylově reaktivní skupiny, včetně maleimidů a pyridyldisulfidů, reagují s thiolovými skupinami na cysteinových zbytcích, zatímco karboxylově reaktivní skupiny, jako jsou karbodiimidy, aktivují karboxylové skupiny za vzniku amidových vazeb s aminy.
KDE SE MŮŽOU KŘÍŽOVÉ LINKERY POUŽÍVAT?
Použití křížových vazeb je široké a rozmanité. Jsou užitečné při studiu interakcí mezi proteiny, protože stabilizují přechodné interakce mezi proteiny, které lze následně analyzovat pomocí technik, jako je hmotnostní spektrometrie nebo Western blotting. Při biokonjugaci připojují síťovače k biomolekulám léčiva, fluorescenční značky nebo jiné sondy, což usnadňuje vývoj léčebných postupů a diagnostiku. V materiálové vědě pomáhají síťovací látky vytvářet sítě v hydrogelech a jiných biomateriálech, které mohou napodobovat biologické tkáně. Kromě toho umožňují imobilizaci biomolekul, jako jsou enzymy nebo protilátky, na pevných nosičích, čímž zvyšují stabilitu a možnost opakovaného použití v různých testech.
Homo-bifunkční vs. bifunkční. Hetero-bifunkční síťovače
Homo-bifunkční síťovače, které mají na obou koncích identické reaktivní skupiny, se používají k propojení podobných molekul, například ke spojení dvou proteinů, které mají stejnou funkční skupinu. Příkladem tohoto typu je disukcinimidylsuberát (DSS), který má dvě N-hydroxysukcinimidové (NHS) esterové skupiny. Naproti tomu heterobifunkční síťovače mají na každém konci jinou reaktivní skupinu, takže jsou ideální pro spojování různorodých molekul, například proteinu a malé molekuly, z nichž každá reaguje s jinou funkční skupinou. Příkladem tohoto typu je Sulfo-SMCC s NHS esterem na jednom konci a maleimidovou skupinou na druhém.
DŮLEŽITÉ ÚVAHY PŘI VÝBĚRU KŘÍŽOVÝCH LINKERŮ
Výběr správného křížového linkeru zahrnuje několik klíčových úvah. Klíčová je specifičnost, protože crosslinker musí cílit na specifické funkční skupiny na molekulách, které jsou předmětem zájmu. Délka distančního ramene v síťovači ovlivňuje vzdálenost mezi spojenými molekulami, což má vliv na funkci a stabilitu konjugátu. Pro biologické aplikace se upřednostňují ve vodě rozpustné síťovače, aby byla zajištěna kompatibilita s vodným prostředím. Některé síťovače jsou navíc navrženy tak, aby byly za určitých podmínek štěpitelné, což umožňuje řízené uvolňování spojených molekul.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?Toto je strojově přeložená stránka.