Test di sterilità

Le procedure di test di sterilità vengono applicate ai prodotti in molti settori industriali, compresi i produttori di alimenti e bevande, ma le industrie principali sono quelle farmaceutiche e mediche, dove il test di sterilità dei prodotti rimane un compito vitale e di routine per i microbiologi.

• Metodi di analisi della sterilità farmaceutica
• Metodi di analisi della sterilità per i dispositivi medici
• Flusso di lavoro per i test di sterilità

Metodi per i test di sterilità farmaceutica

I metodi compendiosi per i test di sterilità dei prodotti farmaceutici richiedono che i campioni siano coltivati in due terreni separati. Nei test di sterilità vengono utilizzati due diversi tipi di terreni di coltura per promuovere la crescita di anaerobi residui, nonché di aerobi e funghi. Il terreno tioglicolato fluido (FTM) è tipicamente utilizzato per la coltura di batteri anaerobi e di alcuni batteri aerobi, mentre il terreno di digestione della caseina di soia (SCDM) è tipicamente utilizzato per la coltura di funghi e batteri aerobi. I campioni vengono incubati per 14 giorni rispettivamente a 32,5 °C e 22,5 °C prima di essere esaminati. Qualsiasi torbidità nei terreni di coltura può indicare una crescita e deve essere esaminata. Esistono due metodi raccomandati per i test di sterilità dei prodotti farmaceutici: la filtrazione a membrana e l'inoculazione diretta.

Test di sterilità per filtrazione di membrana

Il test di sterilità per filtrazione di membrana è il metodo normativo di scelta per i prodotti farmaceutici filtrabili, come citato nella USP <71>, nella Farmacopea dell'Unione Europea <2.6.1> e nella Farmacopea JP <4.06>. I campioni vengono fatti passare attraverso un filtro a membrana da 0,45 µm in un contenitore di filtrazione e viene aggiunto il terreno di coltura per l'incubazione. Questo metodo di analisi della sterilità può fornire una maggiore sensibilità rispetto ad altri metodi, poiché l'intero campione o un campione composito viene fatto passare attraverso un unico filtro. La filtrazione offre anche l'opportunità di risciacquare i componenti del campione che possono causare torbidità o inibire la crescita, come antibiotici o conservanti.

Test di sterilità a inoculazione diretta

Nell'inoculazione diretta, un piccolo volume di campione viene prelevato asetticamente dall'unità di campionamento e inoculato direttamente in un volume adeguato di terreno di coltura prima dell'incubazione. Pur essendo semplice, questo metodo di analisi può presentare alcune limitazioni significative. Solo piccoli volumi di prodotto possono essere inoculati nel terreno di coltura, limitando la sensibilità del test. Se dopo l'inoculazione il campione appare torbido, può essere difficile individuare la torbidità dovuta alla crescita microbica al termine del periodo di incubazione. Inoltre, se il prodotto ha proprietà antimicrobiche, il campione deve essere neutralizzato in modo da non inibire la crescita microbica.

Metodi di test di sterilità per dispositivi medici

Il test di sterilità a trasferimento diretto è consigliato per il test di sterilità dei dispositivi medici. Il dispositivo da testare è a diretto contatto con il terreno di coltura per tutto il periodo di incubazione, durante il quale qualsiasi microrganismo presente nel o sul dispositivo crescerà e prolifererà. Inoltre, il test di sterilità a filo del prodotto è preferibile per i prodotti con tubi cavi, come i gruppi di trasfusione e infusione, dove il percorso del fluido è etichettato come sterile. Il lume del prodotto viene lavato con un fluido di risciacquo, l'eluito viene filtrato a membrana e posto in un terreno di coltura adatto per l'incubazione.

Flusso di lavoro per i test di sterilità

1. Preparazione del test: inserire il tubo del dispositivo di filtrazione a membrana nella pompa

2. Preumidificazione del filtro: bagnare il dispositivo di filtrazione a membrana per ottimizzare la filtrazione e ridurre al minimo il legame del prodotto con il filtro.

3. Filtrazione del campione: filtrare una quantità uguale di prodotto in entrambi i contenitori. I microrganismi sono trattenuti da un filtro con pori da 0,45 µm.

4. Risciacquo-Tutti i composti inibitori vengono risciacquati utilizzando una o più soluzioni di risciacquo adeguate.

5. Riempimento del terreno di coltura: i dispositivi di filtrazione a membrana vengono riempiti con terreni di coltura sterili TSB e FTM. Tempo di incubazione-14 giorni.

7. Risultati del test finale: controllo visivo della torbidità/assenza di torbidità.