Test dei pirogeni
Il test per la ricerca di pirogeni è una fase critica per garantire la sicurezza dei prodotti medici somministrati per via parenterale, come i farmaci o i biofarmaci. Fa parte dei test di rilascio obbligatori per evitare reazioni febbrili pericolose per la vita indotte da sostanze pirogene. Il test di attivazione dei monociti (MAT) è in grado di rilevare sia i pirogeni endotossinici che quelli non endotossinici in un unico test in vitro .Dal luglio 2025, il MAT è il metodo di scelta secondo la Farmacopea Europea per il rilevamento di endotossine e non-endotossine, in sostituzione del Rabbit Pyrogen Test (RPT).
Prodotti
Monocyte Activation Test (MAT)
Utilizzato per rilevare sia le endotossine che i pirogeni non endotossinici in prodotti parenterali, come farmaci e dispositivi medici, il MAT fornisce un in vitro alternativa ai test convenzionali sugli animali, in conformità alle linee guida normative.
Il Rabbit Pyrogen Test e il Limulus Amebocyte Lysate (LAL) sono ampiamente utilizzati per il rilevamento dei pirogeni. Entrambi i metodi utilizzano animali e presentano alcune limitazioni. Il test di pirogeno del coniglio mostra una mancanza di robustezza, poiché la reazione di un animale può differire notevolmente da quella umana. Nel test LAL, vengono rilevate solo le endotossine, il che comporta un rischio per la sicurezza, in quanto vengono ignorati i pirogeni non endotossinici che potrebbero essere presenti nel campione analizzato.
Per superare queste limitazioni, il test di attivazione dei monociti (MAT) è stato introdotto nella Farmacopea Europea nel 2010 come metodo compendiale per sostituire il test dei pirogeni del coniglio (EP Capitolo 2.6.30) e menzionato nella guida FDA per l'industria.
Nota: Il la Commissione della Farmacopea Europea ha preso la decisione di porre fine al test di pirogeno del coniglio in conformità con il principio delle 3R, ritenendo che il MAT sia la migliore opzione alternativa. Dal luglio 2025, il test di pirogeno del coniglio (RPT) è vietato in Europa e il capitolo generale 2.6.8 sul test di pirogeno del coniglio è stato eliminato.
PyroMAT® in vitro test per la rilevazione di pirogeni endotossinici e non endotossinici
Il sistema PyroMAT® si basa sulla linea cellulare Mono-Mac-6 e sulla lettura dell'IL-6. Offre tutti i vantaggi del test di attivazione dei monociti combinati con i benefici dell'utilizzo di una linea cellulare.
- Rilevazione di un'ampia gamma di pirogeni: la sicurezza del paziente è garantita se viene testata l'intera gamma di pirogeni. Come il rabbit pyrogen test (RPT), il MAT è efficace per il rilevamento di pirogeni endotossinici e non endotossinici.
- Estensione della gamma di prodotti che possono essere testati: i metodi più frequentemente applicati, RPT, Bacterial Endotoxin Test (BET) o LAL, sono limitati nei tipi di prodotti che sono in grado di testare. Il MAT offre una maggiore flessibilità nelle sue applicazioni.
- Test in vitro che imita la reazione immunitaria umana: per un modello predittivo robusto che riduce il consumo di animali.
- Conformità alle normative e alle linee guida internazionali: in linea con le tendenze etiche dell'industria e delle autorità di regolamentazione per diminuire l'uso di test basati su animali.
- Reattività standardizzata ed elevata sensibilità (LOD 0,05 EU/mL). La convenienza di una linea cellulare pronta all'uso riduce il lavoro di laboratorio ed evita la necessità di un laboratorio di coltura cellulare.
- Cellule qualificate: oltre ad essere state citate nella validazione internazionale del MAT, le cellule Mono-Mac-6 sono qualificate per l'espressione di tutti i Toll-Like Receptors (TLR) di superficie, per garantire il rilevamento di un'ampia gamma di pirogeni.
Controlli positivi per pirogeni non endotossinici
Il capitolo 2.6.30 della Farmacopea Europea (Test di attivazione dei monociti) richiede che il test preparatorio includa almeno il recettore toll-like TLR4 e che vengano rilevati almeno altri due ligandi del recettore toll-like [...]. La scelta dei pirogeni non endotossinici utilizzati deve riflettere i più probabili contaminanti della preparazione in esame.Per rispondere a questa esigenza, forniamo una gamma estesa di controlli positivi:
- Riflettono diversi tipi di contaminanti solitamente presenti nei processi di produzione farmaceutica (batteri Gram-negativi e Gram-positivi, virus e micoplasmi).
- Targettizzazione di diversi recettori toll-like monocitici (TLR)
Ligando | Target TLR | Tipo di contaminante riflesso | |
|---|---|---|---|
HKSA | TLR2 | Batteri grammo-positivi | |
Flagellina | TLR5 | Batteri Gram-positivi e Gram-negativi | |
PAM3CSK4 | TLR2/1 | Gram-positive and Gram-negative bacteria | |
Resiquimod | TLR7/8 | Virus | |
FSL1 | TLR2/6 | Mycoplasma |
- Rilevazione di un ampio spettro di pirogeni: Come il rabbit pyrogen test (RPT), il MAT rileva sia le endotossine che i NEP.
- Estensione della gamma di prodotti che possono essere testati: I metodi più frequentemente applicati, RPT, Bacterial Endotoxin Test (BET) e LAL, sono limitati nei tipi di prodotti che possono essere utilizzati. Il MAT offre una maggiore flessibilità nelle sue applicazioni.
- Un test in vitro che imita la reazione immunitaria umana: Per un modello predittivo robusto che riduce il consumo di animali.
- Conformità alle normative e alle linee guida internazionali: In linea con le tendenze etiche dell'industria e delle autorità di regolamentazione per ridurre l'uso di test basati sugli animali.
- Sangue crioconservato proveniente da 8 donatori: Per essere il più vicino possibile alla reazione immunitaria umana ai pirogeni.
Ottimizzate o semplificate il vostro metodo di analisi dei pirogeni per una convalida facile e un'analisi efficace dal punto di vista dei costi con le nostre offerte di servizi:
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- Servizi di convalida
- Servizi di formazione
Confronto tra i test di pirogeno Rabbit, LAL e MAT | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Rabbit | LAL | MAT (Sistema PyroDetect) | MAT (Sistema PyroMAT®) | |||
| Tipo di test | In vivo | Ex vivo | In vitro (Sangue intero crioconservato) | In vitro (Linea cellulare monocitica) | ||
| Consumo animale | ++ | + | - | - | ||
| Rilevazione di contaminanti | Endotossine, ad es.g. LPS di batteri Gram-negativi | + | + | + | + | |
| Gram-positivi (LTA) | + | - | + | + | ||
| Lieviti e muffe | + | - | + | + | ||
| Virus | +/- | - | + | + | ||
| Applicazione | Farmaceutici | + | + | + | + | |
| Biologici | + | +/- | + | + | + | |
| Dispositivi medici | + | +/- | + | + | ||
| - | +/- | + | + | |||
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Risorse correlate
- Brochure: PyroMAT® and PyroDetect
Used to detect a broad range of pyrogens in parenteral products such as pharmaceuticals, biopharmaceuticals or medical devices, the MAT gives an in vitro alternative to conventional animal testing in accordance with regulatory guidelines.
- Datasheet: Non-endotoxin Pyrogen Positive Controls
Meet regulatory requirements for Monocyte Activation Test (MAT) with our non-endotoxin pyrogen controls designed for the PyroMAT® system
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