This system may only be used to inactivate genes. This item has an active Cas9 that cuts DNA, causing a deletion or an insertion after the cell repairs the break. This insertion or deletion will result in a frame shift, thereby stopping the correct translation of protein. This is a gene knockout. If a donor DNA template is added, homologous recombination occurs and the donor template is inserted into the DNA. CRISPR activation generally involves a dCas9 (inactive, dead Cas9) that has another functional protein domain fused to it that stimulates RNA transcription. The dCas9 fusion protein for gene activation is generally targeted to the transcription start site (TSS) of genes.
CRISPRPL
CRISPR植物
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| application(s) CRISPR | application(s) CRISPR | application(s) CRISPR | application(s) CRISPR |
General description
単子葉植物と双子葉植物向けのすぐに使用できるオールインワンCas9およびガイドRNA（gRNA）発現プラスミド。
CRISPR Plant Cas9製品は、Agrobacteriumを介した植物の形質転換、微粒子銃、プロトプラストの形質転換を目的としています。本製品は、Streptococcus pyogenesに由来するIIA型 CRISPR-Cas9に基づいています。ネイティブCas9コード配列は、それぞれ単子葉植物と双子葉植物での発現に最適化されたコドンです。単子葉植物Cas9構成要素はsgRNA発現のための単子葉植物U6プロモーターを含み、双子葉植物Cas9構成要素は双子葉植物U6プロモーターを含みます。
植物選択マーカーには、以下のものが含まれます。
CRISPR Plant Cas9製品は、Agrobacteriumを介した植物の形質転換、微粒子銃、プロトプラストの形質転換を目的としています。本製品は、Streptococcus pyogenesに由来するIIA型 CRISPR-Cas9に基づいています。ネイティブCas9コード配列は、それぞれ単子葉植物と双子葉植物での発現に最適化されたコドンです。単子葉植物Cas9構成要素はsgRNA発現のための単子葉植物U6プロモーターを含み、双子葉植物Cas9構成要素は双子葉植物U6プロモーターを含みます。
植物選択マーカーには、以下のものが含まれます。
- ハイグロマイシンB耐性遺伝子
- ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子
- bar遺伝子（ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ）
Application
- 遺伝子の不活性化
- ターゲットバリデーション
- 目的遺伝子の部位特異的な組み込み
- HRによる遺伝子置換
Biochem/physiol Actions
CRISPR／Casシステムは、侵入するウイルスやプラスミドに対する防御手段として、細菌や古細菌によって使用されています。近年、細菌Streptococcus pyogenes由来のII型 CRISPR／Casシステムを工学的に操作し、2つの分子成分：単一のCas9タンパク質とノンコーディングガイドRNA（gRNA）を使用して真核細胞系で機能するようにしました。単一のgRNAでCas9エンドヌクレアーゼをプログラムして、目的とするゲノム位置でDNA二本鎖の切断（DSB）が起こるようすることが可能です。次いで、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）によって誘導されるDSBと同様に、細胞は内因性DNA修復プロセスである非相同末端結合（NHEJ）または相同性指向修復（HDR）のいずれかを活性化して、標的としたDSBを修復します。
Features and Benefits
- CRISPR／Cas9は、簡便さ、利用のしやすさ、コスト、および汎用性の点で特に優れています。
- CRISPR／Cas9システムはタンパク質工学の手法を必要としないため、各標的遺伝子の複数のgRNAを非常に簡単にテストできます。
- gRNA配列の20 ntを変更するだけで標的特異性を変えることができます。
- ZFNおよびTALENと比較して多重化が容易であることがCRISPR／Cas9のもう1つの利点です。複数のサイトでのDSBの同時導入を使用すれば、複数の遺伝子を同時に編集できます。特に、冗長な遺伝子または平行経路をノックアウトする際に有用です。CRISPR／Cas9システムによる多重編集に必要となるのは、単量体のCas9タンパク質と異なる配列特異性を持つ任意の数のgRNAだけです。
- CRISPR／Cas9システムは、ヒト細胞のメチル化DNAを切断し、他のヌクレアーゼの範囲を超えたゲノム修飾を可能にします。これまでCRISPR／Cas9システムによるゲノム修飾は植物では特に探究されていませんが、メチル化DNA切断能はCRISPR／Cas9システムに固有のものであり、標的とするゲノムには依存しないと考えるのが妥当です。
Other Notes
20 ng/ulプラスミドDNA 50ulを含む1バイアル
使用しないときは試薬チューブを閉めておいてください。
DNaseの混入を防ぐために、無菌の実験室技術を適用してください。
使用しないときは試薬チューブを閉めておいてください。
DNaseの混入を防ぐために、無菌の実験室技術を適用してください。
当社のCRISPR植物カスタム製品のご注文は、CUSTOM ORDERING FORMをご覧ください。
Legal Information
保管分類
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 1
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
CRISPRPL-1EA:
jan
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Can this be used to activate genes rather than inactivation? If so, how can it be used to activate certain genes.
1 回答-
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which strain of Agrobacterium tumefaciens is recommended when using p63, p55, p53 or p54 vector
1 回答-
Please navigate to the link https://www.sigmaaldrich.com/techservice, click on "Product Technical Inquiries" under the Products Section with all the required information so that a member of the Technical Service team can reach out to assist further. Thank you.
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1. What type of Cas9 is used in the CRISPR Plant vectors?
1 回答-
Type IIA Cas9 derived from Streptococcus pyogenes.
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Can I use the monocot CRISPR plant vectors on dicots plants and the dicot CRISPR plant vectors on monocot plants?
1 回答-
Yes. But it is not recommended. The monocot CRISPR plant vectors are more suited for monocot plants, and the dicots CRISPR plant vectors are more suited for dicot plants.
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What is the promoter used for the expression of the selection markers?
1 回答-
The 2X35S promoter is used in this case.
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Can one use an Agrobacterium-mediated transformation CRISPR vector for biolistics or protoplast plant transformation?
1 回答-
Yes. However, the biolistics/protoplast CRISPR vectors cannot be used for Agrobacterium-mediated plant transformation.
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What is the promoter used for sgRNA (single guide RNA) expression?
1 回答-
In the monocot CRISPR vectors, it is a wheat U6 promoter. In the dicot CRISPR vectors, it is an Arabidopsis thaliana U6 promoter.
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How can I use the CRISPR plant vectors for homologous recombination (HR)?
1 回答-
First, you need to design an HR DNA donor with the target of interest and the homologous arms. For Agrobacterium-mediated plant transformation, the HR DNA donor can be inserted into an appropriate restriction site, such as the EcoRI site or the HindIII site, within the T-DNA borders. For biolistics or protoplast plant transformation, the HR DNA donor can be inserted into XbaI, EcoRI, HindIII, or XhoI site. Alternatively the HR DNA donor can be co-delivered in a separate donor vector.
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Why did my CRISPR plant construct did not produce the expected target cleavage?
1 回答-
Not every sgRNA will produce the target cleavage. It is recommended to use two to three sgRNAs per gene to increase the successful rate.
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
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Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
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ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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