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洗剤系ウエスタンブロット剥離バッファー

ウエスタンブロットのストリッピングと再プロービングを行うことで、試料を節約できるほか、抗体濃度やインキュベーション時間の迅速な修正・調整が可能になります。このレシピは、界面活性剤であるドデシル硫酸ナトリウム(SDS)と還元剤であるβ-メルカプトエタノール(BME)を用いて、抗体や化学発光・蛍光検出試薬を除去するためのウエスタンブロット用ストリッピング溶液の調製法です。

この計算ツールを使用すると、任意のミリリットル単位の体積に対して、この界面活性剤ベースのウエスタンブロットストリップ溶液を正確に調製することができます。希望する体積を入力し、「計算」ボタンをクリックすると、必要な各成分の量が表に表示されます。

洗剤系ウエスタンブロット剥離液の調製レシピ計算ツール

100 mL Recipe Desired Volume: mL    
20 mL of 10% SDS (71736)   mL of 10% SDS
12.5 mL of 0.5 M Tris-HCl pH 6.8 (FW 157.60)    mL of 0.5 M Tris HCl pH 6.8
0.8 mL of β-mercaptoethanol (63689)   mL of β-mercaptoethanol
Adjust final volume to 100 mL with Milli-Q® Water Adjust final volume to   mL with Milli-Q® Water
  Procedure
 
  1. In a fume hood, place the blot in detergent stripping buffer and incubate with agitation for 30 minutes at 50 °C.
  2. Place the blot in 1X PBS and agitate for 10 minutes. Repeat with fresh buffer.
  3. Optional: Repeat the initial detection protocol (omitting the primary antibody step) to make sure that the antibodies have been inactivated or removed from the membrane.
  4. Place the blot in fresh 1X PBS and agitate for 10 minutes.
  5. Proceed to the blocking step for the next round of immunodetection.
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