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면역 검출 시약 및 기질

차단 시약

결합되지 않은 막 부위를 차단하면 항체의 비특이적 결합을 방지하여 높은 배경을 유발할 수 있습니다. 기존의 우유, 젤라틴 및 기타 단백질 기반 차단제는 많은 블로팅 애플리케이션에 효과적이지만 신호를 마스킹하거나 특정 단백질 표적의 검출을 방해하여 감도 또는 검출을 감소시킬 수 있습니다.Immobilon^®블록 노이즈 제거 시약에는 화학발광, 형광 또는 인 단백질 검출 시 배경 수준을 줄이도록 최적화된 단백질이 없는 즉시 사용 가능한 버퍼가 포함되어 있습니다.

웨스턴 블롯 차단 시약 선택 가이드
원한다면...	사용...	화학 발광 블롯용	비색 블롯용	형광 블롯용	제공
식물성 단백질로 항체 신호를 증폭하려면	Immobilon 시그널 인핸서 (WBSH0500)	예	예	예	사용 가능
화학발광 검출에 최적화된 단백질 프리 차단제	Immobilon Block-CH (WBAVDCH01)	최고	예	아니요	사용 가능
형광 검출에 최적화된 단백질이 없는 차단제
형광 검출에 최적화된 차단제입니다./p>	이모빌론 블록-FL (WBAVDFL01)	아니요	아니요	최고	즉시 사용 가능
인단백질 검출에 최적화된 단백질 프리 차단제	Immobilon Block-PO (WBAVDP001)	예	예	예	사용 준비 완료
비포유류 단백질이 포함된 차단 시약	수성 차단 시약, 연어 혈장 (558300)	예	예	아니요	즉시 사용 가능
HRP 접합체에 최적화된 차단 시약	서양 차단 솔루션 (W0138)	예	예	아니요	사용 가능
대량 무지방 건조 우유	면역블롯 차단 시약 (20-200)	예	예	아니요	벌크 파우더
프리 버퍼링 무지방 건조 우유	5% 무지방 건조 우유가 포함된 인산염 완충 생리식염수(P4739)	예	예	아니요	사전 분할된 분말
비바이오틸화 시료에 대한 차단 농도를 맞춤화하려면	5% 알칼리성 수용성 카제인(70955)	예	예	예	농축 솔루션
아비딘-바이오틴 검출 시스템에 최적화된 단백질 프리 차단	케미블로커(2170)	예	예	아니요	농축 용액
니트로셀룰로스 또는 나일론 막에서 단백질과 핵산 시료를 모두 차단	젤라틴 차단 버퍼(G7663) /p>	예	예	예	벌크 파우더

스트렙타비딘 및 2차 항체 접합체

최신 면역 검출 방법은 스트렙타비딘 또는 2차 항체를 양 고추냉이 과산화효소(HRP) 또는 알칼리성 포스파타제(AP)와 같은 효소에 공유 결합하여 사용하는 효소 결합 검출을 기반으로 합니다. 공액 효소는 특정 기질의 분해를 촉매하여 신호를 생성합니다. 웨스턴 블롯팅에는 다양한 스트렙타비딘, 단백질 A, 단백질 G 및 이차 항체 접합체를 사용할 수 있습니다.

또한 웨스턴 블롯팅에서 화학발광, 발색 및 화학형광 검출을 위한 광범위한 HRP 및 AP 기질을 선택할 수 있습니다.

서양 블롯팅용 화학발광 기질

Immobilon^® 화학발광 검출용 HRP 기질은 더 많은 정량적 블롯을 위한 향상된 감도를 제공하여 검출에 사용되는 항체의 농도를 낮출 수 있어 비용을 절감할 수 있습니다.즉시 사용 가능한 편리한 2성분 또는 2성분 형식의 다양한 감도를 가진 Immobilon® 기질 포트폴리오 중에서 선택하여 웨스턴 블롯 애플리케이션에 맞게 검출을 최적화할 수 있습니다.

Immobilon^® Classico, Crescendo 및 Forte 화학발광 기질는 다양한 감도로 제공되는 퍼옥시다제 기반 검출을 위한 사전 혼합된 즉시 사용 가능한 시약 제품군으로 구성되어 다양한 표적 단백질 농도에 걸쳐 최적의 신호 대 배경 비율을 제공합니다.검출 한계:
- Immobilon^® Classico: ~ 6 pg 의 표적 단백질
- Immobilon^® Crescendo:표적 단백질 1~3개
- Immobilon^® Forte: ~ 400 fg 표적 단백질
Immobilon^® Western HRP, Immobilon.sup>® ECL Ultra 및 Immobilon^® UltraPlus Western 기질은 표준 2성분 포맷에서 탁월한 감도와 긴 신호 수명을 제공합니다. 이러한 제형을 사용하면 면역블롯 검출을 위해 더 희석된 1차 항체 용액을 사용할 수 있습니다. 검출 한계 :
- Immobilon^® Western HRP 기질: ~ 400fg 표적 단백질
- Immobilon^® ECL Ultra 기질: 낮은 펨토그램 범위
- Immobilon^® ECL UltraPlus 웨스턴 블롯 HRP 기질: 낮은 펨토그램 범위

이모빌론^® 화학발광 HRP 기질의 상대적 감도

웨스턴 블롯팅을 위한 Immobilon® 화학 발광 기질의 상대적 감도를 보여주는 2배 희석: Classico(낮은 감도), Crescendo, 포르테, 울트라 및 울트라플러스(가장 높은 감도).

그림 1.4μg 단백질로 시작하는 A431 세포 용해물 [12-110]의 2배 희석 시리즈를 200V에서 25분 동안 10% mPAGE^® 겔 [MP10W15]에서 MOPS 버퍼 [MPM0PS]로 실행했습니다. 단백질을 10% 에탄올이 포함된 mPAGE^® 전이 버퍼 [MPTRB]에서 1시간 동안 Immobilon^®-P 멤브레인 [IPVH00010]으로 전이시켰습니다. 토끼 항-HH3 [H0164] 및 염소 항-토끼 [AP132P] 항체를 나열된 희석 농도로 사용하여 HH3 단백질(15kDa)의 면역 검출을 수행했습니다. 블롯을 표시된 ECL 시약으로 5분간 배양하고 Bio-Rad^® ChemiDoc 시스템에서 30초 노출로 이미지를 촬영했습니다.

Cytiva™ 및 Amersham™ ECL 검출 시약은 강화된 루미놀 기반 HRP 검출을 사용하며, 다양한 제형으로 다양한 웨스턴 블롯 응용 분야의 요구를 충족시킬 수 있습니다.

Cytiva Amersham™ ECL 웨스턴 블롯팅 검출 시약은 확진 웨스턴 블롯팅 애플리케이션에 권장됩니다.
Cytiva Amersham™ ECL Prime 웨스턴 블롯 검출 시약은 동일한 블롯에서 고농도 및 저농도 단백질을 모두 검출할 수 있습니다.
Cytiva Amersham™ ECL Select 웨스턴 블롯 검출 시약은 희석된 1차 및 2차 항체를 사용해도 높은 감도를 제공합니다.
Cytiva Amersham™ ECL Start 웨스턴 블롯팅 검출 시약은 중간 및 고발현 단백질의 화학발광 검출을 위해 개발되었습니다.

서양 블롯팅용 크로모제닉 기질

크로모제닉 검출은 퍼옥시다제(예:, HRP) 또는 알칼리성 포스파타제(AP) 결합 효소를 사용하여 반응을 촉매하여 검출을 위한 불용성 색 침전물을 침착시킵니다. 웨스턴 블롯팅용 발색 기질은 용액, 분말 및 정제 형태로 제공되어 보관 및 사용에 대한 유연한 옵션을 제공합니다.

SIGMAFAST™ DAB 정제(발색 HRP 기질)은 홀스래디쉬 퍼옥시다아제와 반응하면 갈색을 생성하는 비색 침전 기질로 구성되어 있으며 물에 녹여 바로 사용할 수 있는 블롯 검출용 완충 용액을 준비할 수 있습니다.
BCIP/NBT(파란색/보라색) 및 BCIP/TNBT(파란색/갈색) 단일 시약(발색성 AP 기질)은 알칼리성 포스파타제에 대한 매우 민감한 비색 기질입니다.
TMB 강화 단일 성분 HRP 멤브레인 기질(발색성 HRP 기질)은 진한 파란색 제품을 생성하는 단일 성분 비색 기질입니다.

기질	색상	효소	감도
BCIP/NBT	파란색/보라색	AP	높음
빠른 적색 TR(4-클로로-2-메틸벤젠디아조늄)	빨간색/주황색	AP	높음
DAB (3,3'-디아미노벤지딘)	브라운	HRP	중간
TMB (3,3′,5,5'-테트라메틸벤지딘)	진한 파란색	HRP	높음
CN (4-chloro-1-naphthol)	파란색/보라색	HRP	낮음

신호 증강제

Immobilon^® 신호 증강제는 낮은 신호 강도가 관찰될 때 웨스턴 블롯 응용 분야에서 사용하도록 설계되었습니다. 항체-항원 반응을 강화하면 신호 강도를 2~10배 증가시킬 수 있습니다. Immobilon^® 신호 증강제는 PVDF 및 니트로셀룰로스 멤브레인과 호환되며 발색, 화학발광 및 형광 검출 방법과 함께 사용할 수 있습니다.

SignalBoost™ 면역 반응 증강 키트 는 니트로셀룰로스 또는 PVDF 멤브레인에서 화학발광 또는 비색 표적 신호를 향상시키도록 설계되었습니다

스트리핑 및 재프로빙용 시약 및 키트

스트리핑 및 재프로빙 시약은 고정된 단백질에 큰 영향을 주지 않고 웨스턴 블롯에서 항체를 빠르고 효과적으로 제거하도록 특수하게 제조되었습니다.

ReBlot™ Plus 시약은 프로브 블롯에서 결합된 항체를 효율적으로 스트리핑합니다. ReBlot™ Plus 시약은 순한 제형과 강한 제형으로 제공됩니다.