Restriction Enzyme Digest Protocol

Việc thu thập enzyme giới hạn của chúng tôi đã được tối ưu hóa để tiêu hóa bằng năm bộ đệm duy nhất. Khi tiêu hóa DNA bằng một enzyme duy nhất, hãy sử dụng bộ đệm được cung cấp cùng với enzyme.

Giao thức tiêu hóa DNA với một enzyme hạn chế duy nhất

1. Thêm các bộ phận vào ống sạch theo thứ tự như hình:
        1 µL DNA (nồng độ 1 µg/µL)
        2 µL 10x bộ đệm
        1 µL enzyme giới hạn
        16 µL nước vô trùng
   
2. Ủ phản ứng ở nhiệt độ tiêu hóa (thường là 37 °C) trong 1 giờ.
3. Dừng quá trình tiêu hóa bằng cách bất hoạt nhiệt (65 °C trong 15 phút) hoặc thêm nồng độ EDTA cuối cùng 10 mm.
4. DNA tiêu hóa đã sẵn sàng để sử dụng trong các ứng dụng nghiên cứu.

Khi sử dụng hai enzyme giới hạn cùng một lúc, trước tiên kiểm tra các hoạt động của enzyme trong mỗi bộ đệm, sử dụng bảng trên Retriction Enzyme Buffer Reference. Nếu cả hai đều có 100% hoạt động trong cùng một bộ đệm, bạn có thể tiếp tục giao thức tiêu hóa kép của mình bằng bộ đệm đó. Ngoài ra, bộ đệm tối ưu có thể được xác định từ tiếng vang thứ ba của các quá trình tiêu hóa kép phổ biến. Trong một số trường hợp, tiêu hóa tuần tự được khuyến nghị do không tương thích bộ đệm (thành phần hoặc nhiệt độ).

Giao thức tiêu hóa DNA với hai enzyme hạn chế

1. Thêm các bộ phận vào ống sạch theo thứ tự như hình:
        1 µL DNA (nồng độ 1 µg/µL)
        2 µL 10x bộ đệm
        1 µL Mỗi enzyme giới hạn
        15 µL nước vô trùng
   
2. Ủ phản ứng ở nhiệt độ tiêu hóa (thường là 37 °C) trong 1 giờ.
3. Dừng quá trình tiêu hóa do không kích hoạt nhiệt (65°C trong 15 phút) hoặc thêm nồng độ cuối cùng 10 mm EDTA.
4. DNA tiêu hóa đã sẵn sàng để sử dụng trong các ứng dụng nghiên cứu.

Giao thức tiêu hóa DNA tuần tự

1. Thêm các bộ phận vào ống sạch theo thứ tự như hình:
        1 µL DNA (nồng độ 1 µg/µL)
        2 µL 10x bộ đệm
        1 µL enzyme giới hạn
        16 µL nước vô trùng
   
2. Ủ phản ứng ở nhiệt độ tiêu hóa (thường là 37 °C) trong 1 giờ.
3. Dừng quá trình tiêu hóa bằng cách bất hoạt nhiệt (65 °C trong 15 phút) hoặc thêm nồng độ EDTA cuối cùng 10 mm.
4. Phục hồi DNA bằng bộ tinh chế: Tái treo và pha loãng DNA thành 1 µg/µL.
5. Chuẩn bị tiêu hóa thứ hai theo bước 1. Tiếp tục thực hiện bước 3.
6. DNA tiêu hóa đã sẵn sàng để sử dụng trong các ứng dụng nghiên cứu.