ADN ligasa T4

La ADN ligasa T4 cataliza la formación de enlaces fosfosdiéster entre extremos 3′-hidroxilo y 5′-fosfatos vecinos en ADN bicatenario. Las muescas en cadenas individuales del ADN bicatenario también son cerradas por la ADN ligasa T4.

Contenido
ADN ligasa T4, suministrada con tampón de ligadura concentrado x10 que incluye ATP.

Ligadura de fragmentos de ADN con extremos romos y cohesivos.[1][2][3]

Inactivación por calor: La enzima puede inactivarse por calentamiento (65 °C, 10 minutos).

Activador: Mg²⁺ (10mM), DTT
Disolución de trabajo: Para la dilución de la enzima, Roche recomienda la utilización de un tampón que contenga los componentes del tampón de almacenamiento: Tris-HCl 20 mM, KCl 60 mM, EDTA 1 mM, ditieritritol 5 mM, glicerol al 50 % (v/v), pH 7,5 (4 °C).

Calidad

Probada la ausencia de desoxirribonucleasas y exonucleasas de acuerdo con los procedimientos de control de calidad vigentes.

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.

Una unidad de ADN ligasa T4 es la cantidad de actividad enzimática que convierte 1 nmol de ³²P procedente del pirofosfato en material adsorbible en Norit en 20 minutos a +37 °C. Una unidad corresponde a 0,2 U determinadas en el análisis de resistencia de la exonucleasa III. Tampón de dilución: Tris-HCl 50 mM, ditioeritritol 10 mM, seroalbúmina bovina 500 μg/ml, pH 7,6 (+25 °C).

Volumen de actividad: 1 x 10³ U/ml; 5 x 10³ U/ml