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C9891

Colagenasa from Clostridium histolyticum

Type IA, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid, For general use

Sinónimos:

Clostridiopeptidasa A

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Acerca de este artículo

Número CAS:
9001-12-1
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.54
EC Number:
232-582-9
MDL number:
MFCD00130830
Número CE:
3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
Specific activity:
≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

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Quality Segment

200

form

essentially salt-free, lyophilized powder

specific activity

≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

mol wt

68-130 kDa

technique(s)

cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable

solubility

TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble

application(s)

diagnostic assay manufacturing

shipped in

wet ice

storage temp.

−20°C

Application

La enzima se ha utilizado también junto con otras proteasas para la disgregación de tumores humanos, riñón de ratón, cerebro humano y tejidos epiteliales de pulmón. También es útil en los estudios de perfusión de hígado y riñón, de digestión del páncreas, de aislamiento de las células hepáticas no parenquimatosas y los hepatocitos de rata. La enzima de Sigma se ha utilizado para la digestión del colágeno de tipo I procedente de los huesos trabeculares y corticales bovinos.[1] También se ha utilizado como control positivo en el análisis FALGPA en células de Streptococci del Grupo B.[2]

Adecuada para utilizar en la preparación de suspensiones monocelulares para secuenciación.

Biochem/physiol Actions

La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio por mol de enzima. Es inhibida por el ácido etilenglicol-bis(beta-aminoetil éter) - N, N, N′,N′-tetraacético, el beta-mercaptoetanol, el glutatión, el ácido tioglicólico y la 8-hidroxiquinolina.
La liberación eficaz de las células desde los tejidos requiere la acción de las colagenasas y de la proteasa neutra. La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio (Ca2+) por mol de enzima. Se piensa que el filtrado de cultivo contiene como mínimo 7 proteasas diferentes cuyos pesos moleculares oscilan entre 68 y 130 kDa. El pH óptimo se encuentra entre 6,3 y 8,8. La enzima se utiliza normalmente para digerir los componentes conectivos de las muestras de tejido con el fin de liberar células individuales. El tratamiento con colagenasa puede causar la muerte de algunas células. Normalmente se utilizan concentraciones que van de 0,1 a 5 mg/ml para la digestión. La duración de la reacción varía de 15 minutos a varias horas para una eficiencia satisfactoria de la disociación celular sin causar demasiada muerte celular. Se prefiere la disolución tampón de Krebs Ringer con calcio y BSA y se requiere Zn2+ para que haya actividad. La enzima reconoce la secuencia -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, donde X suele ser un aminoácido neutro. Se sabe que el ácido etilenglicol-bis(β-aminoetil éter)-N,N,N′,N′-tetraacético (EGTA)4; el β-mercaptoetanol; el glutatión(reducido); el ácido tioglicólico de sodio; el 2,2′-dipiridil; la 8-hidroxiquinolina y la cisteína inhiben la actividad de la enzima.

Preparation Note

Este producto es equivalente a la primera fracción de sulfato de amonio al 40% de Mandl, I., et al., J. Clin. Invest., 32, 1323 (1953). Las disoluciones se preparan normalmente a una concentración de 1-2 mg/ml en tampón TESCA (que contiene TES 50 mM, cloruro de calcio 0,36 mM a pH 7,4 y 37°C.)

Other Notes

Una unidad de digestión de colágeno (CDU) libera péptidos del colágeno del tendón de Aquiles bovino que equivalen en la reacción de color de la ninhidrina a 1,0 μmoles de leucina en 5 horas a pH 7,4 y 37 °C en presencia de iones calcio. Una unidad de hidrólisis FALGPA hidroliza 1,0 μmoles de furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala por minuto a 25°C. Una unidad de proteasa neutra hidroliza la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmoles de tirosina por 5 horas a pH 7,5 y 37°C. Una unidad de clostripaína hidroliza 1,0 μmoles de BAEE por minuto a pH 7,6 y 25°C en presencia de DTT.

Disclaimer

Tal como se suministra, este producto es estable durante un año a -20°C. No hay pérdida de actividad FALGPA ni actividad proteasa en 30 días a 37°C, 50°C y -20°C. Las disoluciones de colagenasa cruda son estables si se congelan rápidamente en alícuotas (a 10 mg/ml) y se conservan congeladas a -20°C. Otros ciclos de congelación-descongelación dañarán la disolución. El producto retiene el 100 % de su actividad durante 7 horas si se conserva en hielo.

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C7657C9263C1889
Colagenasa from Clostridium histolyticum Type IA, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid, For general use

Sigma-Aldrich

C9891

Colagenasa from Clostridium histolyticum

Colagenasa from Clostridium histolyticum Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid

Sigma-Aldrich

C7657

Colagenasa from Clostridium histolyticum

Colagenasa from Clostridium histolyticum Type V, ≥1 FALGPA units/mg solid, >125 CDU/mg solid

Sigma-Aldrich

C9263

Colagenasa from Clostridium histolyticum

Colagenasa from Clostridium histolyticum 0.2 μm filtered, suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV-S, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

Sigma-Aldrich

C1889

Colagenasa from Clostridium histolyticum

description

Type IA, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid, For general use

description

Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid

description

Type V, ≥1 FALGPA units/mg solid, >125 CDU/mg solid

description

0.2 μm filtered, suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV-S, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

specific activity

≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

specific activity

≥800 CDU/mg solid, 2-5 FALGPA units/mg solid

specific activity

≥1 FALGPA units/mg solid, >125 CDU/mg solid

specific activity

≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

technique(s)

cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable

technique(s)

-

technique(s)

-

technique(s)

-

application(s)

diagnostic assay manufacturing

application(s)

diagnostic assay manufacturing

application(s)

diagnostic assay manufacturing

application(s)

diagnostic assay manufacturing

form

essentially salt-free, lyophilized powder

form

powder

form

powder

form

powder

mol wt

68-130 kDa

mol wt

68-130 kDa

mol wt

113-114 kDa

mol wt

68-130 kDa

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Health hazardExclamation mark
GHS08,GHS07

signalword

Danger

Hazard Classifications

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

target_organs

Respiratory system

Clase de almacenamiento

11 - Combustible Solids

wgk

WGK 1

flash_point_f

Not applicable

flash_point_c

Not applicable

ppe

dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves

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1–3 of 3 Questions  

  1. I have C9891 product 100 mg. How can I prepare a 30U/mL solution? How many mL of buffer should I add to the vial. Thank you!

    1 answer

    1. The activity of this product is reported in the lot-specific certificate on analysis. The minimum activity for C9891 is >/= 125 units per milligram. Most lots test out at a much higher level of activity. It is likely that serial dilutions would be required to achieve the desired concentration.

      Please see the link below for a sample certificate of analysis:
      https://www.sigmaaldrich.com/certificates/sapfs/PROD/sap/certificate_pdfs/COFA/Q14/C9891-BULK0000231203.pdf

      Please see the link below to the product information sheet. Page 2 includes preparation instructions.
      https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/420/044/c9891dat.pdf

      For additional questions or concerns, please navigate to the link https://www.sigmaaldrich.com/techservice, and click on "Product Technical Inquiries" under the Products Section with all the required information so that a member of the Technical Service team can reach out to assist further. Thank you.

      Helpful?

  2. Hello! Can I reconstitute collagenase type I from C. histolitycum using PBS or 0.9% saline solution? Do I need to add CaCl2 to the solution to activate the enzyme? After making the solution can I refreeze it and use it again? For how long? Thank you!

    1 answer

    1. Please see the link below to the product information sheet. Page 2 includes preparation instructions. Several options are listed, however, calcium chloride is required for dissociation:
      https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/420/044/c9891dat.pdf

      Helpful?

  3. For product c9891, collagenase Type IA, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid 100mg How many units are per mg? I need to know U/mg so I can prepare the solution I need. Thank you!

    1 answer

    1. The exact units/mg solid will be listed on the lot specific Certificate of Analysis. Please see the sample Certificate of Analysis provided below as a reference:
      https://www.sigmaaldrich.com/certificates/sapfs/PROD/sap/certificate_pdfs/COFA/Q14/C9891-BULK0000231203.pdf

      Helpful?

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